第一章 FGF-2基础表达的转录调控机制　　 目的：成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)是肝素结合生长因子家族的一员，在心血管系统，FGF-2表达于多种心血管细胞，包括各个发育阶段的心肌细胞和血管细胞。大量的研究结果表明FGF-2在心肌保护、炎症应答、血管发生、血管重构、心肌肥厚、心肌纤维化和缝隙连接传导过程中发挥重要作用。然而，介导心肌细胞FGF-2基因基础表达活性的正性转录调控因子，还未见报道。因此，我们探讨了FGF-2基础表达的转录调控机制。　　 方法和结果：本研究以体外培养的新生SD大鼠的心肌细胞作为试验模型。构建了一系列缺失突变的FGF-2启动子报告质粒，瞬时转染心肌细胞。缺失分析显示FGF-2启动子-16～+59序列是维持新生大鼠心肌细胞启动子活性最关键的区域。计算机软件分析发现该区域存在三个可能的刺激蛋白1(Sp1)的作用序列，-3，+14和+27。凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)显示-3和+14区域存在两个非典型的Sp1结合序列。分别突变这两个结合序列都可以引起FGF-2启动子活性的明显下降，同时突变这两个序列几乎完全取消了启动子的活性。而仅突变+27序列对启动子活性几乎没有影响。最后，染色质免疫沉淀分析揭示Sp1在心肌细胞内可以结合于FGF-2启动子区域。　　 结论：乳鼠心肌细胞FGF-2的基础表达与转录因子Sp1有关。　　 1.启动子-16～+59序列内至少存在一个上调FGF-2转录活性的核心序列。　　 2.Sp1作用于FGF-2启动子-3和+14位点的两个特异性结合域，调节FGF-2转录。　　 3.Sp1可以直接与心肌细胞内的FGF-2启动子结合。　　 第二章参与AngⅡ上调FGF-2表达的信号通路和转录因子　　 目的：在心肌细胞肥厚过程中，参与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导转录因子激活的信号通路，目前仍不太清楚。肥厚的心脏有许多基因表达上调，其中包括成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)。本研究的目的是探讨AngⅡ诱导FGF-2表达的分子机制。　　 方法：本研究以体外培养的新生SD大鼠的心肌细胞作为试验模型，应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹(western blot)技术，免疫荧光分析，观察了AngⅡ诱导新生大鼠心肌细胞FGF-2 mRNA和蛋白表达的量效和/或时效关系；血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡ type1 receptor,AT1R)阻断剂缬沙坦，丝裂原活化的蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)抑制剂U0126、p38激酶抑制剂SB203580和c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对AngⅡ作用的影响；Western blot分析，研究AngⅡ对p44,42MAPK和p38 MAPK的磷酸化水平的影响；瞬时转染和缺失分析寻找FGF-2启动子区潜在的AngⅡ效应元件；凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)证实转录因子与启动子的特异性结合，以及U0126和SB203580对此作用的影响。　　 结果：　　 1.AngⅡ分别从mRNA和蛋白水平上调了新生大鼠心肌细胞FGF-2的表达，这些作用被缬沙坦、U0126和SB203580削弱，而SP600125对此作用无明显影响。　　 2.AngⅡ可以增加心肌细胞p44,42MAPK和p38 MAPK的磷酸化程度。　　 3.FGF-2启动子-845～-666序列内存在潜在的AngⅡ效应元件。　　 4.FGF-2启动子-752位置存在一个非典型的GATA结合域；AngⅡ可以增加GATA和DNA的结合活性，该作用被U0126和SB203580部分拮抗。另外，GATA-4抗体削弱了GATA-DNA的结合活性，而GATA-6抗体和NFκB抗体没有这种作用。　　 结论：AngⅡ作用于AT1R，通过MAPK信号传导级联反应中的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)及P38激酶信号通路介导增加了GATA-4与FGF-2启动子的结合，使FGF-2表达上调。　　 1.AngⅡ作用于AT1R，通过ERK1/2和p38 MAPK信号通路使FGF-2表达上调。　　 2.FGF-2启动子-845～-666序列内存在潜在的AngⅡ效应元件。　　 3.AngⅡ通过激活ERK1/2，p38 MAPK，增加GATA-4与FGF-2启动子的结合。