乙醇作为一种重要的基础工业原料,被广泛用于食品、化工、医药、军工等众多行业。通过基因工程改造、构建酿酒酵母乙醇发酵生产菌种,以提高该产业的乙醇发酵水平,可显著降低其生产能耗和原材料单耗,降低劳动成本,具有极为显著的经济效益,并可同时探讨酿酒酵母乙醇发酵这一最基本的生命现象的规律,具有极其重要的应用与理论意义,一直是微生物学、分子生物学以及乙醇发酵工业等学科领域研究的重点和热点。adh2和ald6二基因分别编码乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶,参与酿酒酵母的乙醇发酵代谢。其中,前者调控催化乙醇生成乙醛的过程,后者调控乙醛氧化为乙酸的过程。本文根据代谢工程原理,以甘蔗糖蜜乙醇发酵高产菌株MF1015为出发菌株,通过建立稳定的单倍体细胞系,利用同源重组原理敲除这二个基因,再进行菌株核型复倍,成功构建了双倍体突变菌株MF1015-△adh2-△ald6。研究结果如下：以MF1015为出发菌株,构建该菌株的a型和α型单倍体。构建adh2和ald6基因敲除组件,并分别转化到a型和α型单倍体中。筛选得到阳性克隆子后转入pSH65表达质粒,半乳糖诱导消除抗性基因,pSH65表达质粒后经传代遗失。将a型和α型的目的单倍体菌株混于YEPD培养基中使其自然交配复倍,最终筛选得到突变菌株MF1O15-△adh2-△ald6。蔗糖发酵实验显示,该突变菌株与原出发菌株MF1015相比,乙醇产量提高8.59%,乙酸产量降低9.75%；糖蜜补料发酵实验显示,该菌株与原出发菌株MF1015相比,乙醇产量提高5.39%,乙酸产量降低7.47%,残糖利用率提高3.56%。经多次传代后,该突变株生长特性保持不变,具有较好的遗传稳定性。结果表明突变菌株MF1015-Δadh2-Δald6是一株具有应用潜力的酿酒酵母菌株。