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目的 探讨人脐带间充质干细胞条件培养基(hUC-MSCs-CM)干预对辐射诱导小鼠海马体神经元细胞(HT22)凋亡及内质网应激PERK-ATF4-CHOP通路的影响,阐明其相关的作用机制,为放射性脑损伤(RBI)的防治提供新思路。方法 1采用酶消化法分离培养hUC-MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态,流式鉴定细胞表型。选取生长对数期良好的第3代hUC-MSCs用无血清的IMEM培养基继续培养48h,收集上清制备hUC-MSCs-CM。2采用6MV-XRay直线加速器照射HT22细胞制备放射性神经元损伤模型,分别用hUC-MSCs-CM和PERK磷酸化抑制剂GSK2606414干预,设计实验分5组:空白对照组(Control组)、单纯照射组(RT 组)、照射+hUC-MSCs-CM 组(RT+MSCs-CM 组)、单纯 hUC-MSCs-CM 组(MSCs-CM 组)、照射+GSK2606414 组(RT+GSK2606414 组)。各组经上述刺激培养24h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,采用Annexin V/PI双染色法流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,采用Western Blot法检测各组细胞GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP 蛋白的表达水平。结果 1倒置显微镜下观察第3代hUC-MSCs细胞形态类似于成纤维细胞,呈长梭状生长、旋涡式生长;流式细胞术检测hUC-MSCs细胞表型:hUC-MSCs表达基质细胞相关的表面抗原CD73、CD90和CD105;不表达造血干细胞标记的CD11b、CD34,不表达CD19,不表达人类白细胞共同抗原CD45和MHC-Ⅱ类HLA-DR。2与Control组相比,RT组HT22细胞数明显减少,细胞皱缩、变圆,漂浮细胞增多,分别给予MSCs-CM、GSK2606414干预后,HT22细胞数增多,贴壁生长,形态完整,未见细胞皱缩,漂浮细胞少;与Control组相比,RT组HT22细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),分别给予RT+MSCs-CM共刺激、RT+GSK2606414共刺激后,辐射后HT22细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05);RT 组与 Control 组相比,GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP 蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与RT组比较,hUC-MSCs-CM组可以下调辐射诱导的HT22细胞内的GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP蛋白的表达(P<0.05),这一结果与PERK通路抑制剂GSK2606414干预辐射诱导的HT22细胞,下调GRP78、p-PERK、ATF4、CHOP蛋白表达结果一致,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1 hUC-MSCs-CM干预能够减少辐射诱导的HT22细胞的凋亡。2 hUC-MSCs-CM干预可以减轻辐射诱导的HT22细胞的内质网应激,可能与PERK-ATF4-CHOP通路有关。图10幅;表5个;参159篇。