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目的:观察PI3K/m TOR双重抑制剂NVP-BEZ235对体外培养血管瘤内皮细胞增殖、凋亡及PI3K/AKt/m TOR信号通路中关键分子的影响,探讨PI3K/m TOR双重抑制剂对体外培养血管瘤内皮细胞的作用及机制。方法:1.选取手术切除的婴幼儿血管瘤标本,组织块结合酶消化法培养原代血管瘤内皮细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞生长特点,绘制生长曲线。细胞传至第四代后,采用第Ⅷ凝血因子相关抗原进行鉴定。3.无血清培养基处理血管瘤内皮细胞24h后,干预组加入0.50μM、1.00μM NVP-BEZ235,空白对照组加入完全培养基,共同孵育24h。通过CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期,免疫蛋白质印迹方法检测PI3K、p-Akt、m TOR及p70s6k蛋白的表达水平,分析血管瘤内皮细胞增殖及凋亡变化与四种蛋白表达水平的相互关系。结果:1.血管瘤原代培养1周后出现少量贴壁细胞,3周后细胞由组织块向周围成同心圆式分布并且生长速度加快,4周后细胞基本铺满培养瓶底,显微镜下观察可看到梭形或稍不规则形态的细胞,成铺路石样排列。第Ⅷ凝血因子相关抗原鉴呈阳性表达。2.NVP-BEZ235干预24h后,CCK-8细胞增殖检测显示,0.50μM、1.00μM NVP-BEZ235组的OD值分别为(0.88±0.03、0.59±0.05),与对照组(1.10±0.02)比较,差异均有显著性(P<0.01,t=7.05、13.07);且1.00μM组比0.50μM组对细胞增殖的抑制作用更强,差异具有显著性(P<0.01,t=9.23)。3.流式细胞术检测显示,0.50μM组G0/G1期细胞比例为(60.62±0.71)%,1.00μM组G0/G1期细胞比例为(65.99±2.55)%,均较对照组(53.71±1.43)%高,差异均有显著性(P<0.01,t=-7.51、-7.28);且1.00μM组较0.50μM组更高,差异有有统计学意义(P<0.05,t=-3.51)。4.流式细胞术检测显示,0.50μM组内皮细胞总凋亡率为(9.20±0.75)%,1.00μM组内皮细胞总凋亡率为(13.13±1.72)%,均较对照组(2.77±1.23)%升高,差异均有显著性(P<0.01,t=-9.80、-8.93);且1.00μM组较0.50μM组更高,差异有有统计学意义(P<0.05,t=-3.62)。5.蛋白免疫印迹检测显示,0.50μM NVP-BEZ235组PI3K(0.16±0.03)、p-Akt(0.13±0.01)、m TOR(0.12±0.02)蛋白表达水平较对照组PI3K(0.25±0.01)、p-Akt(0.17±0.01)、m TOR(0.19±0.00)下降,p70s6k(0.18±0.01)蛋白较对照组(0.10±0.02)升高,差异具有显著性(P<0.01,t=4.71、8.51、6.62、-6.26);1.00μM NVP-BEZ23组PI3K(0.10±0.01)、p-Akt(0.10±0.01)、m TOR(0.05±0.00)蛋白表达水平较对照组下降,p70s6k(0.31±0.02)蛋白较对照组升高,差异具有显著性(P<0.01,t=26.68、15.40、38.84、-14.77);且1.00μM NVP-BEZ235组较0.50μM NVP-BEZ235组,PI3K、p-Akt、m TOR蛋白水平下降更为明显,p70s6k蛋白蛋白水平上升更为明显,差异具有显著性(P 0.01,t=3.69、7.83、6.19、-11.55)。结论:1.PI3K/AKt/m TOR信号通路参与了体外培养血管瘤内皮细胞增殖、凋亡过程;2.NVP-BEZ235可以通过调控PI3K/AKt/m TOR信号通路而抑制体外培养血管瘤内皮细胞的增殖,且可能有剂量依赖性。