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目的:以C57Bl/6小鼠为研究对象,观察左旋丁苯酞对血管性痴呆(Vascular Dementia,VaD)模型小鼠海马细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:本研究分为三部分。以雄性C57Bl/6小鼠为研究对象,采用反复三次结扎双侧颈总动脉的方法,给予脑缺血20min(ischemia,I)-再灌注10min(reperfusion,R)处理,建立VAD小鼠模型,灌胃(ig)给予l-NBP,每日1次,分为5组,每组15只,分别为对照组、模型组、预防组:术前预防给药7d(l-NBP30mg/kg),低剂量治疗组:术后给药28d(l-NBP30mg/kg)和高剂量预防组:术后给药28d(l-NBP60mg/kg)。在模型制备后的第29天利用Morris水迷宫试验进行学习和空间记忆能力的测试,模型组和模型组各取一只小鼠,灌注取材,留取胼胝体标本行电镜观察;硫堇染色观察海马组织病理学变化;用免疫组织化学法以及Western-blot检测小鼠海马组织中的Bcl-2、Bax的蛋白表达;PCR检测小鼠海马组织中Bcl-2、Bax的mRNA水平。结果:1Morris水迷宫试验结果1.1学习能力结果1.1.1第一天各组学习成绩无统计学差异。1.1.2第二天,模型组与模型组相比时间略有延长(P<0.05),低剂量治疗组比模型组时间减少(P<0.05)。1.1.3第三天,低剂量治疗组比模型组上台时间减少(P<0.05)。1.1.4第四天,模型组,低剂量治疗组,预防组均较模型组上台时间缩短,小鼠学习能力趋于稳定。1.1.5第五天,模型组,低剂量治疗组,高剂量治疗组,预防组均较模型组上台时间缩短,其中以高剂量治疗组和预防组的上台平均时间最短。1.2记忆能力结果1.2.1第四象限时间(%)模型组以及预防组在第四象限停留的时间比模型显著延长((P<0.05)。2电镜结果2.1对照组胼胝体区内血管壁光滑,血管内皮细胞排列紧凑;髓鞘排列规则、紧密,未见脱髓鞘改变。2.2模型组血管壁粗糙、增厚,弹力膜中断,弹力纤维、胶原纤维增生,基膜及基板不完整。可见神经纤维不同程度的退行性改变,髓鞘的正常纹理不清,结构紊乱。3硫堇染色结果3.1对照组海马CA1区神经元排列整齐、致密,细胞形态完整、边界清晰,胞核大而圆、核仁清晰。神经元计数为203.53±11.04。3.2模型组在海马CA1区可观察到部分神经元死亡,存在断裂带,残存的神经元胞体皱缩,形态不规则,胞核固缩、浓染,核仁不清或消失。神经元计数为69.23±2.14。同模型组相比P<0.05。3.3低剂量治疗组海马CA1区细胞数目较对照组少,较模型组略多,细胞形态完整,边界清晰,仅见个别锥体细胞核固缩,减少。神经元计数为114.92±2.08。同模型组相比P<0.05。3.4高剂量治疗组神经元排列整齐、致密,胞核饱满、核仁较清晰,无明显的细胞缺失。神经元计数189.92±3.18。同模型组相比P<0.05.3.5预防组大体观察同高剂量治疗组,神经元计数199.92±2.96同模型组相比P<0.05。4Bcl-2/Bax蛋白及mRNA水平4.1免疫组化以及Western-blot结果均显示模型组较模型组Bcl-2/Bax降低,而应用丁苯酞干预组虽在趋势上显示Bcl-2/Bax升高,但不具备统计学意义。4.2PCR的结果示:5组数据没有显著地升与降的趋势。结论:1通过应用电镜技术对胼胝体超微结构的观察以及经Morris水迷宫试验的行为学测试,证实了本研究的VaD模型制造成功,此模型小鼠存在学习和记忆功能障碍,并且预防性应用左旋丁苯酞可以显著降低血管性痴呆的发生与发展。2左旋丁苯酞治疗组和预防组的神经元均较模型组有增多。左旋丁苯酞可以逆转VaD小鼠海马组织病理学变化,进而改善其学习和记忆能力。3在本实验的5组中,模型组中Bcl-2/Bax降低,而左旋丁苯酞干预组虽有数据上的变化,但不具备统计学意义,反复脑缺血再灌注后激活了细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax,阻止了神经元的凋亡,而这一途径不是左旋丁苯酞发挥其治疗血管性痴呆的主要机制。