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研究背景自低能量激光首次被发现其生物学作用至今已经超过半个世纪,且被临床各个科室应用于医疗实践的诸多方面,市场上也有家用的低能量激光器械用于治疗脱发、缓解疼痛及促进恢复。但学术界对低能量激光治疗在不同应用场景的最佳频率、最适能量密度、低能量激光产生作用的机制以及低能量激光对某些疾病是否有治疗作用仍存在争议。创伤延迟愈合甚至是不愈合不仅会给患者带来巨大的身心痛苦,同时也将加重社会医疗系统的负担。促进创伤愈合是目前低能量激光治疗最常见的应用之一,皮肤创伤愈合是多细胞协同作用的结果,包括毛囊干细胞在内的多种皮肤干细胞在此过程中发挥重要作用,而目前尚无关于低能量激光治疗对皮肤创伤愈合中毛囊干细胞作用及机制的研究。研究目的1.探索低能量激光对小鼠全层皮肤创伤愈合中毛囊干细胞的作用及其可能的作用机制。2.探索低能量激光对体外小鼠CK 15+毛囊干细胞生物学行为的影响及其机制。研究方法1.使用直径5 mm环钻将去除背部毛发后的C57/BL6N小鼠制成全层皮肤创伤动物模型,并将其随机分为低能量激光治疗（Low-level laser treatment,LLLT）低剂量组（LLLT-Low）、低能量激光治疗高剂量组（LLLT-High）和对照组（Control）。自造模之日起至取材前一日,每隔24小时以激光梳照射LLLT-Low组和LLLT-High组小鼠创面及创缘皮肤,能量密度分别为1 J/cm2（照射时间=38秒）和10 J/cm2（照射时间=380秒）,对照组以普通日光灯照射。于造模0、3、5、10、14天大体拍照并进行创面闭合比例分析;于造模3、5、10、14天取材行苏木精伊红染色（hematoxylin and eosin,HE）和CK 15免疫荧光染色;取低剂量激光处理后10天的组织标本进行全转录组测序（Whole transcriptome sequencing,RNA-Seq）、基因本体分析（Gene Ontology analysis,GO分析）并使用蛋白质免疫印迹检测（Western Blot,WB）及酶联免疫吸附实验实验（ELISA）验证。2.通过毛囊干细胞分离培养、纯化及免疫荧光鉴定得到体外毛囊干细胞,并将其分为低能量激光治疗组（LLLT）和对照组（Control）。LLLT组每隔6小时以能量密度为1 J/cm2低能量激光照射,对照组以普通日光灯照射。并在照射后应用CCK-8实验和BrdU荧光染色实验检测细胞增殖能力,应用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移能力,应用ELISA、RT-PCR和WB蛋白印迹实验检测IL 34细胞因子表达情况。研究结果1.创面闭合比例分析显示LLLT-Low组创伤愈合加快,LLLT-High组愈合过程无明变化,其差异在愈合过程中期（5-10天）最明显。HE染色发现LLLT-Low组创面周围毛囊数量较多且呈现向创面内迁移的趋势。LLLT-High组毛囊数量无明显增多,未见毛囊向创面内明显迁移。免疫荧光染色发现LLLT-Low组在各时间点CK 15+毛囊干细胞总数均高于对照组和LLLT-High组,进入创面中CK 15+毛囊干细胞的数目和最远迁移距离随时间明显增加且5天以后明显高于对照组和LLLT-High组。全转录组测序和Western免疫印迹发现LLLT-Low组包括CK 15在内的毛囊干细胞相关的基因表达明显上调,提示毛囊干细胞的增殖。GO分析发现LLLT-Low组中以IL 34为代表的细胞因子活性明显上调,ELISA证实了 LLLT-Low组中IL 34的表达上调。2.CCK-8实验和BrdU荧光染色实验结果显示低能量激光治疗可促进体外CK 15+毛囊干细胞增殖。细胞划痕实验发现在24小时和48小时LLLT组CK 15+毛囊干细胞迁移能力优于对照组,促进效果在48小时更为显著。Transwell小室实验发现LLLT组毛囊干细胞在12小时迁移即显著高于对照组。ELISA和RT-PCR实验从蛋白和转录水平发现低能量激光治疗可促进IL 34等细胞因子的表达,WB蛋白印迹实验验证了这种表达上调存在。结论1.低能量激光治疗可通过上调细胞因子IL 34促进CK 15+毛囊干细胞增殖、分化和迁移进而促进小鼠皮肤创伤愈合。2.1 J/cm2低能量激光治疗可促进体外CK 15+毛囊干细胞的增殖和迁移并促进IL 34等细胞因子的表达。