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研究背景及目的重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是由抗乙酰肌碱受体抗体(acetylcholine receptor antibody,AChR-Ab)介导,针对神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)突触后膜上乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)进行性破坏的一种自身免疫性疾病。目前MG尚无特异性治疗方法,因此迫切需要明确MG的发病机制。实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)是MG的一种可靠动物模型,两者在临床表现、电生理学及免疫学上都具有很大的相似性。EAMG多以电鳗器官AChR为免疫抗原,但其在国内很难获得,故需要一种简单易行成功率高的建立重症肌无力模型的方法。研究表明Th17在MG/EAMG的发病机制中具有十分重要的作用,在EAMG发病机制中Th17辅助B细胞产生自身抗体不依赖于Th1。CXCL13是一种在免疫反应中其重要作用的趋化细胞因子,在B淋巴细胞寻靶和迁移到淋巴组织中T和B细胞区起重要作用。最近报道体外人Th17克隆表达CXCL13,而Th1和Th2不表达。那么在大鼠EAMG中IL-17与CXCL13表达水平的关系需进一步证实。10%~20%的MG患者合并有胸腺瘤,33%-75%的胸腺瘤患者同时合并有重症肌无力。行胸腺切除术后重症肌无力的临床症状减轻以及痊愈的患者占70%。因此我们认为胸腺瘤和重症肌无力的发生有着密切的关系。但胸腺瘤合并MG的机制目前还不是很清楚,探讨IL-17和CXCL-13及CD4+T在人胸腺瘤合并MG发病机制中的作用非常重要。本研究以大鼠eamg和27例胸腺瘤患者为研究对象,探讨结核杆菌h37ra剂量与eamg发病相关性,il-17和cxcl13在eamg和胸腺瘤合并mg中的表达及相关性,旨在探讨建立高成功率eamg的方法,揭示il-17和cxcl13在mg发病机制中的作用,为临床治疗提供新靶点。实验方法1.h37ra在实验性自身免疫性重症肌无力模型中的作用:用大鼠achrα亚单位97–116肽段(dgdfaivkftkvlldytghi)、完全弗氏佐剂并辅以结核杆菌h37ra作抗原建立lewis大鼠eamg动物模型。通过对大鼠eamg的临床评分观察来发现结核菌素在模型建立中的作用。2.il-17和cxcl-13在eamg发病机制中的作用:在用肽段免疫建立大鼠eamg同时给予外源性il-17,elisa法检测大鼠脾、淋巴结上清液和血清cxcl13水平,大鼠血清igg1,igg2a,igg2b抗体水平,与pbs对照组比较。3.il-17和cxcl-13在胸腺瘤合并mg中的作用:回顾分析患者的相关临床资料,并对胸腺瘤组织蜡块进行il-17、cxcl-13和cd4+免疫组化研究,然后将结果与相关临床资料进行比较,探讨il-17和cxcl-13在胸腺瘤合并重症肌无力中的作用。4.统计学分析:采用spssl7.0统计软件分析,组间比较采用t检验,以p<0.05为差异有显著性意义。结果1.用大鼠achr-α亚单位97–116肽段免疫lewis大鼠后,出现两个发病时相,分别开始于免疫后第7天、第35天左右,并分别于第15天和第40天左右达到发病高峰。增加h37ra的剂量,大鼠eamg发病率高达75%,且其症状明显加重。2.eamg大鼠脾、淋巴结细胞上清液和血清中的cxcl13水平均高于空白对照组。给予外源性il-17的实验组大鼠血清achr特异性抗体ig2b明显高于给予pbs注射的对照组,脾、淋巴结细胞上清液和血清中的cxcl13水平均高于给予pbs注射的对照组。3.b1、b2和b3型为主的胸腺瘤合并mg的可能性较大分别为50%、60%和66.7%,而c型同时合并mg的可能性非常小,而良性的胸腺瘤并发重症肌无力的概率越大,且主要为Ⅱ型,淋巴细胞型胸腺瘤易伴发重症肌无力。胸腺瘤合并MG的胸腺瘤组织高表达细胞因子IL-17和CXCL-13以及CD4+细胞。结论1.研究证实本方法建立的Lewis大鼠EAMG动物模型可广泛用于今后的相关研究,且H37RA可以显著的提高模型的成功率。2.IL-17和CXCLl3在EAMG发病中起重要作用。3.胸腺瘤合并MG高表达IL-17和CXCLl3和CD4+细胞。