【摘 要】
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目的:探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(即CHR,Chromofungin)对LPS所诱导的永生化人脑微血管内皮细胞高通透性的影响及其相关分子机制。方法:(1)分别用不同浓度的LPS(0.01、0
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目的:探讨嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(即CHR,Chromofungin)对LPS所诱导的永生化人脑微血管内皮细胞高通透性的影响及其相关分子机制。方法:(1)分别用不同浓度的LPS(0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50μg/ml)刺激HBMEC细胞,用CCK8法检测细胞活力变化并筛选出LPS最佳处理浓度;(2)分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞,Western blot法检测不同时间点紧密连接蛋白的表达情况,筛选出最佳作用的时间点;(3)分别用LPS、CHR、CGA4-16作用于人脑微血管内皮细胞,Transwell小室法及EVOM法检测内皮细胞相对通透性;Western blot及RT-PCR法检测紧密连接蛋白(ZO-1和Claudin-5)的表达情况。结果:(1)与空白组相比,随着LPS浓度增加HBMEC细胞的活性受到显著抑制(均P<0.05);当LPS浓度为5μg/ml时,细胞抑制率约为50%。(2)随着LPS作用时间延长,其细胞内紧密连接相关蛋白ZO-1、Claudin-5的表达逐渐下调,6h后蛋白表达量降到最低(均P<0.05),12h和24h后其蛋白表达与6h相比无明显差异。(3)LPS作用下HBMEC单层细胞电阻值明显降低(t=-18.214,P<0.001),细胞通透性显著升高(t=6.083,P=0.004),ZO-1、Claudin-5的蛋白和mRNA表达明显下调(均P<0.05),而CHR可显著改善上述变化(均P<0.05)。结论:嗜铬粒蛋白A衍生多肽CHR能够改善LPS所致的脑微血管内皮细胞高通透性,其机制可能与其紧密连接相关蛋白的表达上调有关。
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