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目的：γ-谷氨酰水解酶(GGH)是甲氨蝶呤(MTX)聚谷氨酸化的一种关键酶,是一种溶酶体酶,通过裂解MTX多聚谷氨酸盐(MTXPGs)的谷氨酸残基使MTX重新流出细胞,从而使MTX在细胞内的作用减弱,高水平的GGH与MTX的耐药有关。本实验通过研究GGH基因全编码区单核苷酸多态性(cSNPs)在急性白血病(AL)患儿和正常儿童中的分布情况,并以期发现新的多态性位点,分析各基因型在两组之间的分布差异。方法：从92例AL患儿的骨髓和124例正常儿童的外周血中提取总RNA,逆转录制备cDNA。采用RT-PCR-变性梯度凝胶电泳(RT-PCR-DGGE)结合DNA直接测序技术对以上cDNA标本进行GGH基因cSNPs及基因突变的筛查与鉴定。结果：首次在中国汉族儿童中鉴定了GGH基因4个国外已筛查到的cSNPs,即T16C(Cys6Arg)、G91A (Ala31Thr)、A268G (He90Val)和C452T (Thrl51He),并确定了AL患儿和正常儿童中GGH各cSNP位点的等位基因频率和基因型分布特征在AL组及正常儿童组中,GGH452位点T等位基因频率分别为8.7%和10.1%,16位点C等位基因频率分别为20%和17.1%,91位点A等位基因频率分别为20%和16.7%,268位点G等位基因频率分别为1.1%和0.8%。这些cSNPs在两组人群的等位基因频率及基因型频率的差异无统计学意义,表明这些多态性与白血病的易感性无相关性。此外发现中国汉族儿童与日本、非裔-美洲及墨西哥人群的GGH452位点T等位基因频率差异均具有统计学意义(P<0.05)。并发现两个新的错义突变：在正常对照组中发现GGH的第2外显子191位点存在T→G碱基替代,导致第64位氨基酸由亮氨酸(Leu)被色氨酸(Trp)替代；在白血病患儿中发现GGH基因第8外显子779位点存在A→G碱基替代,即第260位氨基酸由组氨酸(His)变为精氨酸(Arg),产生另一新的错义突变杂合子。结论：在中国汉族人群中利用PCR-DGGE结合DNA直接测序技术对GGH基因进行大规模cSNPs筛查,发现4个国外已报道到的cSNPs,即T16C (Cys6Arg)、G91A(Ala31Thr)、A268G (Ile90Val)、C452T (Thrl51He),并初步确定了中国AL患儿和正常儿童中GGH各SNP位点的等位基因频率和基因型分布特征；在国内用统计学方法证实不同种族人群GGHC452Tl的等位基因频率存在明显差异,说明GGH C452T基因多态性存在种族差异性,提示MTX药效在种族间也可能存在较大差别；在GGH中发现2个新的错义突变,即T191G (Leu64Trp)和A779G (His60Arg),为国际首次报道。