罗氏海盘车(Asterias rollestoni)水溶性海星皂苷的分离纯化及其部分生物学活性研究

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海星皂苷是具有广泛生理和药理活性的天然海洋活性物质。目前,对海星皂苷的提取主要采用稀醇萃取法,这种方法存在着有机溶剂使用量大、成本高、易污染环境、不利于工业化推广等一系列缺点,而且所得海星皂苷水溶性较差,在很大程度上限制了其在临床和农业等领域的应用途径和应用范围。但至今仍未见到有关水溶性海星皂苷的分离纯化及其生物学活性的研究报道。本文旨在利用水抽提法、大孔树脂吸附、硅胶柱层析以及Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱等方法对水溶性海星皂苷进行提取和分离纯化,并从中筛选出具有较强抗真菌和抗肿瘤活性的单体组分。对水抽提物的大孔吸附树脂70%乙醇洗脱组分的性质鉴定结果显示,所得水溶性海星皂苷粗品为甾体皂苷。抗真菌活性鉴定结果表明,水溶性海星皂苷粗品对黑曲霉(Aspergillus niger)、白色念珠菌(Candida albicans)、啤酒酵母菌(Saccharomyes cerevisise)、裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces probe)、黄瓜枯萎病原菌(Fusarium oxysporumf.sp.cucumerinum)、葡萄炭疽病原菌(Colletotrichum gloeosporioides)6种真菌均具有显著的抗真菌活性,其最低抑菌浓度(MIC值)分别为0.625、0.625、0.313、0.156、1.25和0.625 mg/mL。抗肿瘤活性的鉴定结果显示,水溶性海星皂苷粗品对体外培养的HeLa宫颈癌细胞、SGC-7901胃癌细胞、A-549肺癌细胞和Bel-7402肝癌细胞均具有显著的抗肿瘤活性,其IC50值分别为14.66、15.37、13.44和12.74 g/mL。对水溶性海星皂苷粗品进行硅胶柱层析,分离纯化得到4种水溶性海星皂苷纯化组分pSF-1、pSF-2、pSF-3和pSF-4。其抗真菌活性的鉴定结果表明,pSF-3和pSF-4具有显著的抗真菌活性。抗肿瘤活性鉴定结果表明pSF-3和pSF-4具有显著的抗肿瘤活性,其中,pSF-3对HeLa宫颈癌细胞、SGC-7901胃癌细胞、A-549肺癌细胞和Bel-7402肝癌细胞的IC50值分别为7.05、5.28、5.32、6.16 g/mL,pSF-4对HeLa宫颈癌细胞、SGC-7901胃癌细胞、A-549肺癌细胞和Bel-7402肝癌细胞的IC50值分别为7.24、5.94、5.24、6.21 g/mL。利用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱对硅胶柱层析组分进行纯化,得到了SF-3纯化组分。高效液相色谱(HPLC)对其纯度进行测定的结果表明,SF-3组分纯度高达96%以上,已为单体组分。对SF-3单体组分进行体外抗肿瘤活性鉴定结果显示,2.5、5和10μg/mL的SF-3单体组分对体外培养的HeLa和Bel-7402肝癌细胞均具有显著的抑制作用;对SF-3单体组分进行体外抗肿瘤活性的研究结果表明,灌胃剂量为2、5和10 mg/kg体重的SF-3单体组分能够显著抑制小鼠S180实体瘤的生长,其抑制率分别为23.34%、36.33%和46.53%,且10 mg/kg体重的SF-3单体组分能显著提高S180荷瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数。综上所述,本文利用水抽提、大孔树脂吸附、硅胶柱层析以及Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析等方法得到了具有显著抗真菌活性和抗肿瘤活性的水溶性海星皂苷纯化组分pSF-3和pSF-4以及具有体内外显著抗肿瘤活性的SF-3单体组分,为利用其研发天然高效抗肿瘤和抗真菌海洋药物奠定了基础。
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