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课题一钾离子通道阻滞剂对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响目的:多种钾离子通道涉及恶性肿瘤细胞增殖的调控,通过观察不同钾离子通道阻滞剂对人宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,初步探讨不同亚型钾通道,特别是大电导钙激活型钾通道在宫颈癌细胞增殖中的作用,为进一步研究钾通道参与恶性肿瘤细胞增殖调控的机制奠定基础。材料和方法:以不同浓度四乙胺、粉防已碱及格列苯脲分别作用于体外培养的人宫颈癌细胞株HeLa,通过MTT法、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术,分别检测不同钾通道阻滞剂对HeLa细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响,并以免疫印迹法检测四乙胺、粉防已碱和格列苯脲对p53、p21及Bax表达水平的影响,初步探讨钾通道阻滞剂抑制肿瘤细胞增殖及诱导其凋亡的机制。结果:四乙胺、粉防已碱可在体外抑制HeLa细胞增殖,其增殖抑制效应具有时间依赖和剂量依赖的特点,并能诱导肿瘤细胞凋亡、使细胞周期阻滞于G0/G1期;格列苯脲则对HeLa细胞的增殖无影响。四乙胺与粉防已碱可上调p53、p21及Bax蛋白的表达。结论:大电导钙激活型钾通道对人宫颈癌细胞增殖的调控具有重要作用,其抗肿瘤效应可能与上调p53、p21及Bax蛋白表达有关。大电导钙激活型钾通道可能成为潜在的恶性肿瘤治疗靶点。课题二热休克蛋白和p53在钾通道介导的肿瘤细胞凋亡与增殖中的作用目的:多种钾离子通道涉及恶性肿瘤细胞增殖的调控,通过探讨BK通道参与恶性肿瘤细胞增殖与凋亡的调控机制,为进一步研究钾通道参与恶性肿瘤细胞增殖调控的机制奠定基础。材料和方法:通过观察不同钾离子通道阻滞剂对人宫颈癌HeLa细胞、人卵巢癌A2780细胞增殖的影响,以不同浓度四乙胺、粉防已碱及格列苯脲分别作用于体外培养的人宫颈癌细胞株HeLa及人卵巢癌A2780细胞,通过MTT法、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、Hoechst33258染色及流式细胞术,分别检测不同钾通道阻滞剂对HeLa细胞增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响,并以免疫印迹法检测四乙胺、粉防已碱和格列苯脲对p53、p21、Bax、HPV18E6、HSP70、HSP90a及HSP90β表达水平的影响,并通过全细胞膜片钳技术验证肿瘤细胞膜是否存在大电导钙激活型钾通道,初步探讨钾通道阻滞剂抑制肿瘤细胞增殖及诱导其凋亡的机制。结果:四乙胺、粉防已碱可在体外抑制HeLa细胞增殖,其增殖抑制效应具有时间依赖和剂量依赖的特点,并能诱导肿瘤细胞凋亡、使细胞周期阻滞于G0/G1期;格列苯脲则对HeLa细胞的增殖无影响。四乙胺与粉防已碱可上调HeLa与A2780细胞p53、p21及Bax蛋白的表达、抑制HSPs的表达诱导细胞凋亡,对HeLa细胞的增殖抑制效应并不通过影响HPV18E6来实现。HeLa与A2780细胞膜均记录到对四乙胺和粉防已碱敏感的外向钾电流。结论:大电导钙激活型钾通道对恶性肿瘤细胞增殖和凋亡的调控具有重要作用,其抗肿瘤效应可能与上调p53信号通路,将调HSPs来实现,大电导钙激活型钾通道可能成为潜在的恶性肿瘤治疗新靶点。