论文部分内容阅读
前列腺癌在西方国家是男性常见病,在引起死亡的原因中仅次于肺癌。随着生活水平的提高和寿命的延长,我国前列腺癌目前呈快速上升趋势,估计在不久的将来将成为我国男性常见病。前列腺癌缺乏特异性临床症状,并易与前列腺增生症、前列腺炎等疾病混淆,40%—50%的前列腺癌病人确诊已属晚期,不宜行根治性手术,前列腺癌有雄激素依赖性和雄激素非依赖性两种前列腺癌细胞,雄激素依赖性前列腺癌在去除雄激素之后,发生细胞凋亡,因此睾丸切除(或药物去势)+抗雄激素治疗是治疗中晚期前列腺癌的主要方法之一。雄激素非依赖性前列腺癌在去势后不发生细胞凋亡,目前对该型前列腺癌缺乏特异的治疗方法。棉酚是存在于棉籽中的一类物质,其抗男子生育作用是我国学者首先发现,它的抗生育作用在临床及基础的研究达40余年。研究表明,在体内和体外,棉酚可抑制多种癌细胞的增殖。棉酚可抑制人类雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC3的生长,其抑制作用通过流式细胞仪监测,监测表明,棉酚使得PC3细胞停滞在G0/G1期,而不向S期和G2/M期转化,这种抑制作用呈时间和剂量依赖性。而且,棉酚在抑制PC3细胞DNA合成、使其停滞在G0/G1期的同时,影响TGF-β1基因的表达。这就是说,TGF-β1可能介导棉酚对PC3细胞的抑制作用。棉酚对前列腺癌细胞增殖和转移的抑制作用也有报道。CHANG CJ等研究两个月龄的Copenhagen雄大鼠模型,皮下注射高转移性、雄激素非依赖型前列腺癌细胞系MAT-LyLu Dunning。经棉酚治疗两周以后,MAT-LyLu前列腺癌肿块和前列腺的重量分别减少了24%(p<0.05)和31%(p<0.05),而睾丸和附睾的重量没有明显变化。棉酚处理的大鼠只有20%发现有淋巴结或肺脏转移,而对照组大鼠,肺脏转移为60%,淋巴结转移为40%。因此,棉酚对MAT-LyLu前列腺癌细胞具有抑制增殖和抑制转移的作用,可用棉酚治疗雄激素非依赖性前列腺癌。棉酚还影响人类前列腺癌细胞O2的消耗和CO2的产生,机制可能是因为扰乱了线粒体琥珀酸的氧化磷酸化过程。醋酸棉酚具有降低睾丸内雄激素水平的作用,常规剂量副作用仅有低钾,发生率约1%,口服补钾后即可缓解。最近研究发现棉酚具有诱导前列腺癌细胞MAT-lylu、白血病细胞系HL-60凋亡的作用,C-MyC,C-jun,C-fos等均有重要作用。bax基因是细胞凋亡的重要调控基因,它表达过程中各个环节的变化直接影响细胞凋亡的全过程。本课题目的是研究醋酸棉酚诱导前列腺癌RM-1细胞凋亡状况及在此过程中bax基因表达的变化,以完善醋酸棉酚抗癌机制的研究,为临床使用醋酸棉酚治疗前列腺癌提供实验数据。本实验采用MTT法检测各不同浓度棉酚对RM-1细胞的抑制情况,测得RM-1细胞半数抑制时棉酚的浓度为30.56mg/L,确定最佳干预浓度为30mg/L,在此浓度下分别采用透射电镜、Hoechst33258荧光染色法,观察棉酚诱导小鼠RM-1前列腺癌细胞凋亡的情况;采用流式细胞仪检测棉酚诱导RM-1细胞凋亡时各不同时期的凋亡率及Bax蛋白表达量,RT-PCR检测棉酚诱导该细胞凋亡时bax基因mRNA水平的变化。电子显微镜、Hoechst33258荧光染色法,在30mg/L棉酚作用下,各时段均能观察到典型的细胞凋亡情况,即显示细胞缩小、包膜皱缩、表面微绒毛消失、核固缩、沿核膜分布、核碎裂等显著的形态学改变;流式细胞仪分析,可见典型G1峰出现;随着药物作用时间延长,凋亡率增加Bax蛋白表达也有明显增加,两者有明显相关性,RT-PCR显示bax基因mRNA水平也有明显上调。本研究提示诱导RM-1细胞凋亡是棉酚抗肿瘤的重要机制,并且影响bax基因表达可能是其重要路径,可通过干预其表达,增强诱导凋亡作用达到治疗肿瘤的目的。