论文部分内容阅读
目的:制备一种新型的以CD59配体肽(CD59 specific ligand peptide,CD59sp)为引导肽,负载藻蓝蛋白(C-phycocyanin,C-PC)的羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl chitosan,CMC)纳米微球(C-PC/CMC-CD59sp),并对其特征及靶向抗肿瘤机制进行研究,以实现藻蓝蛋白对HeLa细胞的靶向治疗。方法:采用离子交联法制备靶向羧甲基壳聚糖纳米载药颗粒,用响应面优化法选出最佳条件。利用透射电镜、激光粒度仪、红外光谱仪等观察纳米微球表征,MTT法检测靶向纳米颗粒对He La细胞生长的影响,溶血实验检测纳米颗粒的组织相容性及安全性,共聚焦显微镜检测He La细胞对纳米微球的摄入及纳米微球对He La细胞形态的影响,western blot检测cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达,免疫荧光法检测Bcl-2蛋白的表达,流式细胞术检测He La细胞周期的变化。结果:优化了纳米微球的制备条件,获得纳米级微球。最佳制备条件为:CMC与C-PC投药量为3:1,CMC浓度为2.0mg/ml,Ca Cl2浓度为1.0mg/ml。纳米微球平均粒径约为200nm,球形,包封率为65%,载药量为20%,体外表现出缓释特征,未发生溶血现象,在CD59sp的引导作用下,能靶向高效抵达He La细胞表面,并对He La细胞增殖有明显抑制作用。该微球可促进cleaved caspase-3和cleaved PARP蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,促进凋亡信号在胞内的转导,同时发现该纳米微球能明显抑制细胞周期的进程,细胞出现G1期阻滞现象。结论:成功制备出靶向纳米药物C-PC/CNC-CD59sp,并证实该药物具有靶向性、缓释性、安全性。此外该药物的靶向抗肿瘤作用主要通过抑制He La细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制细胞周期进程来实现的。本研究为海洋药物的开发提供新的思路,并对肿瘤药物靶向治疗提供了理论依据。