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本次课题通过收集2005年-2010年静安区手足口病常规报表、监测资料等分析手足口病的流行趋势。应用RT-PCR、细胞培养等实验技术对2009年-2010年监测点手足口病病例标本进行检测,分析引起手足口病的病毒病原型别分布和肠道病毒EV71的VP1基因特征,以了解静安区手足口病的流行规律和分子流行病学特征。通过实验研究不同浓度含氯消毒剂对肠道病毒71型的灭活效果,从而为指导本区手足口病防控措施的制定提供依据。本课题研究内容包括以下几个内容：1.上海市静安区2005-2010年手足口病流行特征分析2005年发病率为20.44/10万,2006年为18.72/10万,2006年较2005年有所下降。2007年发病率为31.32/10万,2008年为24.84/10万,较2007年有所下降。2009、2010年手足口病的发病率均较2008年有所上升,但2005-2010年静安区本市人口手足口病年发病率以2007年最高。发病高峰集中在每年的5-7月份,2009年11月还出现第二个发病高峰。手足口病的年发病率以位于静安区西北部的曹家渡和江宁街道较高,其他街道总体发病率较低。男女性别比约为1.4：1,5岁以下儿童比例达到83.80%。以幼托机构儿童比例最多。2.上海市静安区2009-2011年手足口病病原监测结果分析2009-2011年分别收集监测点上海市儿童医院临床诊断手足口病例咽拭、肛拭标本90份、180份和242份,采用Real-time RT-PCR方法进行检测。结果显示,2009-2011年间,监测点儿童手足口病例中柯萨奇病毒A16型(CA16)阳性率逐年下降,而肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒属其他病毒(EV)阳性率呈上升趋势。对2010年7月至2011年12月监测点临床诊断手足口病例175例分别采集咽拭和肛拭标本,分别用Real-time RT-PCR方法进行EV71、CA16、EV检测。用McNemar检验比较两种标本检测结果的差异,EV71和EV在咽拭子和肛拭子两种标本检测结果有差异,P值均<0.05,CA16在两种标本中的检测结果无显著差异。应用Kappa检验,Kappa值均>0.4,显示咽拭子和肛拭子的检测结果基本一致。根据本次实验配对标本检测EV71、CA16、EV结果不一致与标本采集时间进行分析,推断肠道病毒可能在发病2天内在咽部大量繁殖扩增,此时通过呼吸道传播的可能性较大。将2010年7月至2011年12月监测点临床诊断手足口病例采集的175对咽拭和肛拭标本Real-time RT-PCR检测结果按照标本采集时间进行分析,对于EV71来说,咽拭标本在发病后3天、4-11天均可检出阳性,而CA16、EV在发病3天后都无法检出阳性,说明EV71在呼吸道带毒持续时间长于CA16和肠道病毒属病毒。3.上海市静安区人肠道病毒71型基因进化研究随机选择2010年不同月份19份PCR阳性的标本进行Vero细胞培养,其中1例为重症培养物、18份为非重症培养物,对EV71病毒PCR扩增产物序列(VPl基因1200bp)系统发生分析,所有19株EV71病毒与2007年山东及2008年安徽阜阳EV71分离株同属C基因型中的C4a亚型。将本次研究的19株EV71分离株的VPl基因与从GenBank中检索到EV71各基因型和亚型的代表株序列,包括A、B、Cl、C2、C3、C4和C5亚型进行氨基酸和核苷酸同源性分析,其中C4亚型选择的是2008年安徽省阜阳市流行株。分析发现,19株EV71分离株的VP1基因与C基因型代表株核苷酸同源性在84.3%-97.1%,氨基酸同源性在88.6%-98.3%；与C4基因亚型最为相近,其核苷酸同源性在95.0%-97.1%,氨基酸同源性在95.1%-98.3%。我国自1998年从广东省分离鉴定出C4b亚型EV71分离株后,至2003年国内EV71亚型一直为C4b。2003-2004年,EV71的C4a和C4b两个亚型在我国共存,如浙江、广东、台湾。从2005年至今,上海、河南、云南、北京、山东、安徽、浙江等地分离到的EV71均为C4a亚型,重症和散发病例基因型相同无差异。而美国、澳大利亚、马来西亚、新加坡、日本等国在不同时间段内都曾出现过不同的EV71基因亚型。4.含氯消毒剂对肠道病毒71型灭活效果的研究肠道病毒71型主要通过粪口途径和密接接触传播。目前,上海地区幼托机构通常使用有效氯浓度为500mg/L的含氯消毒剂对儿童的玩具、毛巾及课桌、门把手等物体表面进行消毒。因此,我们通过试验研究观察了该浓度含氯消毒剂对悬液内EV71病毒的杀灭效果。由于消毒剂对细胞的毒性,本次实验发现有效氯浓度为500mg/L的含氯消毒剂作用5min即可对悬液中的EV71病毒达到至少99.99%的杀灭率；与有效氯浓度为1000mg/L的含氯消毒剂杀灭率相一致。由于试验采用的为病毒悬液,消毒剂与肠道病毒能够直接接触作用,但在日常消毒工作中,含氯消毒剂对包裹在毛巾、衣物中的病毒的杀灭作用会受到物品中有机物、静电吸附等因素的影响。因此,对于怀疑有手足口病患儿接触污染的物品,可通过提高有效氯浓度(1000mg/L或更高)或延长消毒剂作用时间进行消毒处理,保证病毒灭活效果,预防手足口病的传播。