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奉节脐橙(Citurs sinensis L.Osbeck)是“华盛顿脐橙”品系的选优株系。作为重庆市柑橘中的优良品种,在内外销中具有着较强的竞争优势。然而,奉节脐橙果皮容易发生褐变,对脐橙果皮褐变的诱发因素已有大量研究,但在分子机理研究方面尚十分缺乏。通过对在本实验室前期构建的脐橙果皮褐变相关基因的cDNA差减文库分析。筛选了一个与钙调蛋白基因同源的EST序列,通过快速扩增cDNA末端(RACE)方法成功克隆得到全长,命名为CsCAB, GenBank登录号EF010854。前期工作已经证明CsCAB是褐变相关蛋白[7],但对于CsCAB蛋白在脐橙褐变过程中的调控模式以及功能并不清楚。本研究首先运用半定量RT-PCR的方法分析了脐橙钙调蛋白基因(CsCAB)在果皮褐变发生进程和不同组织中的表达模式。结果表明,CsCAB基因在不同的植物组织中表达丰度不同,伴随果皮褐变指数的上升,CsCAB基因的表达增强。同时,本研究分析了在机械损伤的胁迫条件下CsCAB的表达情况,结果表明CsCAB及其下游靶基因ATPase和GAD受到机械损伤的诱导。由于钙调蛋白本身并没有功能,主要是通过传递信号给下游靶蛋白,从而调控着植物的生理过程。所以,果皮褐变的过程中,钙调蛋白可能通过调控下游的一系列靶蛋白发挥着重要的作用。本研究以脐橙果皮为材料,提取RNA并进行RT-PCR扩增,克隆了CsCAB基因全长cDNA序列,并对其进行序列分析。结果表明,CsCAB包含一个621 bp的开放阅读框(ORF),编码207个氨基酸;CsCAB蛋白与钙离子结合蛋白同源蛋白,且具有钙调素家族的保守结构域EF-hand。并成功构建了含有CABV35S启动子和35S终止子的CsCAB基因植物表达载体pCAMBIA-CsCAB。并将其转入根癌农杆菌GV3101中,然后通过农杆菌介导法将CsCAB基因导入烟草,经PCR检测,外源基因已整合到烟草基因组中,并对获得的阳性转基因植株通过GUS组织化学染色及RT-PCR进行了表达分析。