目的利用体外实验和小鼠脑缺血动物模型，分析三七提取物（Sanchi extract，SE）的免疫学效应，评价其对缺血脑损伤小鼠脾脏细胞保护作用并探讨相关机制，为其在临床上的应用提供理论依据。方法1．采用体外实验，分析SE对小鼠淋巴细胞行为的影响。以多克隆刺激剂刀豆蛋白A（concanavalin，Con A）或者佛波醇酯（phorbol 12，13-dibutyrate，PDB）加离子霉素（ionomycin，Ion）进行刺激淋巴细胞活化和增殖，利用荧光标记的单克隆抗体双染技术，流式细胞术检测小鼠淋巴细胞CD69表达情况；通过CFDA-SE染色流式细胞术检测淋巴细胞的增殖；并以碘化丙锭（propidium iodide，PI）染色分析细胞周期分布；Fluo-4／AM染色分析细胞内Ca²⁺浓度。2．评价SE对脑缺血脾脏细胞凋亡的影响。以结扎小鼠右侧颈总动脉（Common carotid artery occlusion，CCAO），建立脑缺血动物模型。通过细胞计数分析术后各组小鼠胸腺和脾脏细胞总数；体外以刀豆蛋白A（Con A）或者脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激CCAO小鼠脾脏细胞增殖，通过MTT比色法和CFDA-SE染色流式细胞术检测SE对CCAO小鼠脾脏细胞增殖的影响；并以PI染色分析SE对CCAO小鼠胸腺和脾脏细胞凋亡的影响；同时利用体外实验分析，SE对地塞米松诱导的正常小鼠胸腺细胞凋亡和LPS诱导的脾脏细胞增殖的影响。3．以炎症和自由基损伤学说为出发点，初步探讨CCAO小鼠脾脏细胞凋亡机制。建立脑缺血动物模型，流式细胞术检测SE对CCAO小鼠早期外周血淋巴细胞CD69表达的影响；通过H₂DCFDA染色流式细胞术检测外周血中性粒细胞、淋巴细胞和脾脏细胞反应性氧族（reactive oxygen species，ROS）的变化；采用NO测定试剂盒和H₂O₂测定试剂盒分别检测小鼠血清中的NO和H₂O₂水平；同时采用体外实验检测SE对正常小鼠腹腔巨噬细胞产生NO的影响。结果1．体外实验结果表明，随着药物浓度的增加，SE对Con A刺激小鼠淋巴细胞活化和Con A或者佛波醇酯（PDB）加离子霉素（Ion）诱导的小鼠淋巴细胞增殖，具有明显的抑制作用。细胞周期分析结果显示，不同浓度三七提取物均能明显阻止活化的淋巴细胞进入S期和G2／M期，而处于亚二倍体峰的细胞数基本不变。同时研究还证实，SE对细胞外Ca²⁺内流具有明显的促进作用。2．体内实验研究发现，CCAO诱导小鼠胸腺和脾脏出现明显的萎缩现象，并且脾脏细胞对ConA应答能力明显下降，但对LPS应答反应无明显变化；同时脾脏细胞培养48 h后，CCAO组小鼠细胞凋亡率明显升高。与此同时，药物治疗组小鼠脾脏、胸腺的重量和细胞总数明显增加，对Con A和LPS诱导的增殖反应均明显强于CCAO组，并且细胞培养48 h后，细胞凋亡率也明显下降。同时结合体外实验，结果表明不同浓度的SE对地塞米松诱导的细胞凋亡具有明显地保护作用，并且也能明显增强LPS诱导的正常小鼠脾脏细胞的增殖反应。3．缺血性脑损伤22 h，伪手术组、CCAO组和药物治疗组各组间外周血中T淋巴细胞CD69表达，淋巴细胞和脾脏细胞ROS变化并无明显差异，但药物治疗组外周血中CD3^-淋巴细胞CD69表达和中性粒细胞ROS的水平明显高于CCAO组；与伪手术组相比，CCAO组小鼠血清中H₂O₂（22 h，96 h）和NO（22 h）水平明显上升，而药物治疗组小鼠血清中H₂O₂和NO水平又明显降低；体外研究表明，SE12.5μg／m～100μg／ml能不同程度地抑制经LPS和淋巴细胞培养上清激活的腹腔巨噬细胞分泌NO的水平。结论1．体外实验表明，SE具有明显的免疫学抑制效应，其对小鼠淋巴细胞的活化、增殖有明显抑制作用，能够抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期等，但其对细胞外Ca²⁺内流却有明显的促进作用。2．SE能明显抑制CCAO小鼠胸腺和脾脏萎缩，这可能与SE保护CCAO小鼠脾脏细胞的凋亡，以及其能协同细胞因子促进小鼠脾脏细胞增殖反应有关。3．在CCAO早期，清除自由基可能是SE保护脑缺血小鼠脾脏细胞凋亡机制之一。