蟾皮为蟾蜍科(Bufonidae)动物中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans Cantor)的干燥皮，具有抗肿瘤、抗乙肝病毒等药理作用，临床中用于治疗多种肿瘤，乙型肝炎、慢性气管炎、咽喉肿痛、痈肿疔毒等。目前有以蟾皮为原药材的制剂市售，但主要是提取了蟾皮中水溶性成分，多为普通剂型，如片剂、口服液、胶囊剂等。现有研究表明，蟾皮中除了水溶性成分外，脂溶性的二烯内酯类成分也具有很好的抗肿瘤作用，尤其是抗肺部肿瘤。因此，有必要将蟾皮中的所有抗肿瘤活性组分进行提取，以充分利用蟾皮药材抗肿瘤的药效组分，为蟾皮创新制剂的研发提供基础。　　 干粉吸入剂(dry powder inhalers，DPI)是一种新型的肺部给药系统，由于其不使用抛射剂和溶剂，靠患者自主呼吸产生的气流使药物粉末雾化，进而使药物粉末传递到肺部，具有靶向、高效、速效、毒副作用小及应用方便等特点，是一种新型的给药系统。本课题充分提取蟾皮中的活性组分，将其制备成千粉吸入制剂，使药物直接作用于肺部肿瘤，提高抗肺癌的靶向性，降低毒副反应的发生，提高药物的生物利用度。以蟾皮为原药材，对抗肿瘤活性成分测定并结合体外细胞实验筛选所用药材产地;采用大孔树脂分离纯化蟾皮抗肿瘤活性组分，对所得组分药效进行体外实验筛选，获得了P30和P70药效组分;对蟾皮抗肿瘤活性组分中主要成分理化性质进行考察;初步探索制备药物-载体乳糖-微粉化乳糖组成的一个三元混合体系的干粉吸入剂，为蟾皮抗肺部肿瘤创新制剂提供基础。本文的主要研究内容分为两部分:首先对蟾皮化学成分、药理作用;干粉吸入剂研究进展及乳糖在干粉吸入剂中的应用进行了文献综述。其次为实验部分，主要研究内容如下:　　 一、对不同产地蟾皮中抗肺癌活性成分进行含量测定，并结合体外细胞实验，筛选最优药材产地。建立了HPLC法测定6个不同产地蟾皮中所含抗肿瘤活性成分蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾素毒基和酯蟾毒配基的含量。同时以5-羟色胺为对照品，紫外分光光度法测定蟾皮中总生物碱的含量。MTT法测定蟾皮提取物对人肺癌A549和SPC-A-1细胞的增殖抑制作用，并计算了不同产地蟾皮提取物的IC50值。含量测定结果表明，蟾毒它灵含量最高的为河北产地，为84.3μg·g-1，蟾毒灵最高的为山东产地，为90.3μg·g-1，华蟾酥毒基和脂蟾毒配基含量高的为江苏产地，分别为176.7和134.8μg·g-1，且四种成分总量最高的为江苏产地，为472.6μg·g-1。江苏产地蟾皮中总生物碱的含量最高，为1.51mg.g-1生药。MTT实验结果表明，六个产地的蟾皮对两种细胞的抑制率均表现出浓度依耐性，药物的浓度越高，细胞的抑制率越高。在两种人肺癌细胞系中，江苏产蟾皮对细胞的抑制率最强，其IC50值在两种细胞系中均最小，在A549细胞中为4.37mg生药·mL-1，SPC-A-1细胞中为5.38mg生药·mL-1。因此，选择江苏产地的蟾皮作为实验药材。　　 二、正交实验优化蟾皮抗肺癌活性成分提取工艺的研究。采用HPLC法测定蟾皮乙醇提取液中蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾素毒基和酯蟾毒配基的含量，紫外分光光度法测定蟾皮提取液中总生物碱的含量。以四种成分的总量.总二烯羟酸内酯和总生物碱为指标，以乙醇浓度、乙醇加入量、提取时间和提取次数为考察因素，筛选影响蟾皮抗肿瘤活性成分提取的最佳条件。结果表明，蟾皮抗肿瘤活性成分提取的最佳工艺为:用8倍量浓度为90％的乙醇提取2次，每次1.5h。经验证实验表明，所筛选得到的提取最佳工艺可行，可有效提取蟾皮中抗肿瘤活性成分。　　 三、大孔树脂分离纯化蟾皮醇提取物及不同洗脱部位的体外药效研究。采用HPLC法测定乙醇洗脱液中蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量，紫外分光光度法，以5-羟色胺为对照品，测定乙醇洗脱液中的总生物碱含量。通过静态吸附和解吸附实验，对选用的树脂进行了筛选，结果选用AB-8树脂进行动态实验，考察了四种成分及总生物碱的动态吸附及解吸附性能，所选用树脂适合于蟾皮有效组分的分离纯化。MTT法测定不同浓度乙醇洗脱液提取物对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用。结果表明，四个不同浓度乙醇洗脱液中提取物对细胞均表现出抑制作用，其中30％和70％乙醇洗脱液的细胞抑制率较高，30％乙醇洗脱液的IC50值为1.83μg提取物·mL-1，70％的为2.23μg提取物·mL-1。经成分分析，30％乙醇洗脱液中主要为生物碱（初步判断为蟾蜍噻咛），70％乙醇和90％乙醇洗脱液中的成分属于二烯羟酸内酯类成分，50％乙醇洗脱液中的成分有待研究。　　 四、70％乙醇洗脱液中主要成分理化性质考察。建立了HPLC法测定70％乙醇洗脱液中华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量。采用平衡法测定了华蟾酥毒基和脂蟾毒配基在不同pH磷酸盐缓冲液中的溶解度，摇瓶法测定两者在不同pH磷酸盐缓冲液-正辛醇中的油水分配系数。采用平衡透析法考察了华蟾酥毒基和脂蟾毒配基在大鼠、比格犬和人空白血浆中的血浆蛋白结合率。结果表明，相同pH条件下，华蟾酥毒基的溶解度高于脂蟾毒配基的溶解度。pH7.0时，两者的溶解度均达到最大，华蟾酥毒基为42.3μg·mL-1，脂蟾毒配基为37.6μg·mL-1。脂蟾毒配基的LogP值大于华蟾酥毒基，所以脂蟾毒配基的脂溶性更强，两者均为典型的疏水性化合物。华蟾酥毒基在人、大鼠和比格犬血浆中的平均血浆蛋白结合率分别为85.63％、80.21％和70.10％，酯蟾毒配基分别为84.51％、75.11％和70.60％，且两者血浆蛋白结合率表现出人＞大鼠＞比格犬。　　 五、蟾皮抗肺癌活性组分干粉吸入剂的初步制备与评价。以引湿性、粒径分布、密度、休止角为指标，结合干粉吸入剂专属性实验，排空率和体外沉积率，建立了干粉吸入剂的评价指标。以30％和70％乙醇洗脱液中的提取物为蟾皮活性组分，且活性组分与乳糖用量为1∶9。通过筛选乳糖类型和乳糖用量，初步筛选了蟾皮抗肿瘤活性组分干粉吸入剂的处方。结果表明，同时使用InhaLac(R)230和Respitose(R)ML006，且Respitose(R)ML006∶InhaLac(R)230∶药物的用量为1.4∶7.6∶1时，蟾皮活性组分的排空率和体外沉积率均最高　　 本课题对蟾皮中的抗肺癌组分进行了系统分离和活性追踪，获得蟾皮抗肿瘤活性组分。初步探索了蟾皮多组分肺部给药干粉吸入剂的制备，将制备的制剂用于肺部肿瘤的治疗，为蟾皮药效成分抗肺部肿瘤的新剂型研究提供基础，同时也为中药多组分肺部给药系统的新剂型研究提供基础，