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目的:前期长链非编码RNA(lncRNA)芯片结果显示:左归丸、右归丸含药血清诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化时,XR007366(7366)长链非编码RNA(lncRNA)下调,XR009483(9483)lncRNA上调。为了进一步验证芯片结果,通过过表达XR007366lncRNA和干扰XR009483lncRNA后左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化能力的变化,证明补肾中药能够通过lncRNA调控BMSCs的软骨分化。 方法:使用PacI线性化的腺病毒DNA转染HEK293细胞收取病毒,转染相应lncRNA,得到7366lncRNA过表达腺病毒和9483lncRNA干扰腺病毒。将P2代BMSCs分成8组:分别为BMSCs组,BMSCs+软骨诱导剂组,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸含药血清+空病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸含药血清+7366lncRNA过表达腺病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸含药血清+9483lncRNA干扰腺病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+右归丸含药血清+空病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+右归丸含药血清+7366lncRNA过表达腺病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+右归丸含药血清+9483lncRNA干扰腺病毒组。8组同时在相同环境培养21d。对8组培养后的细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达情况。 结果:Real-timePCR结果显示,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸、右归丸含药血清后,Ⅱ型胶原mRNA含量明显高于单纯的BMSCs+软骨诱导剂(P<0.05);加入7366lncRNA过表达腺病毒和9483lncRNA干扰腺病毒,Ⅱ型胶原mRNA含量低于BMSCs+软骨诱导剂+左归丸、右归丸含药血清+空病毒组(P<0.05)。WB结果显示加入左归丸、右归丸含药血清组Ⅱ型胶原蛋白含量明显高于单纯的BMSCs+软骨诱导剂(P<0.05);加入7366lncRNA过表达腺病毒和9483lncRNA干扰腺病毒,Ⅱ型胶原蛋白含量明显降低(P<0.05)。 结论:左归丸、右归丸含药血清能够促进BMSCs软骨分化;过表达7366lncRNA和干扰9483lncRNA后,抑制左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化;说明7366lncRNA抑制左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化,9483lncRNA促进左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化,与芯片结果一致。证明补肾中药左归丸和右归丸能够通过lncRNA调控BMSCs的软骨分化。