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【目的】:铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa PA)是假单胞菌中最常见的院内感染条件致病菌。目前临床耐药性及耐药水平发展较快,成为医院感染监测细菌的重点,引起了人们的极大重视。近年随着亚胺培南在临床上的广泛应用,使得铜绿假单胞菌对亚胺培南也呈现出逐年增加的趋势。
本实验目的为了调查成都地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制。
【方法】采用琼脂二倍稀释法检测临床分离62株铜绿假单胞菌对亚胺培南、美洛培南、头孢他定等几种常用抗菌药物的MIC值。用PCR方法和SDS-PAGE蛋白电泳方法检测铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2缺失情况。利用巯基乙酸以及EDTA与亚胺培南纸片联合法检测细菌产金属酶情况。用CCCP抑制试验检测细菌是否存在主动外排泵,同时利用RT-PCR方法检测耐药菌株与敏感菌株之间在OprM和OprN表达差异。
【结果】62株临床分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南、美洛培南、左氧氟沙星、环丙沙星、氨曲南、头孢吡肟、头孢哌酮、头孢他定、阿米卡星耐药率分别为45.16%、29.03%、46.80%、46.00%、56.00%、27.42%、58.06%、30.64%、12.20%。通过PCR扩增发现了11株铜绿假单胞菌存在OprD<,2>孔道蛋白缺失。仅有一株细菌通过巯基乙酸与亚安培南纸片联合法筛选得到产金属酶阳性结果。耐药组铜绿假单胞菌在OprM表达上高于耐药组铜绿假单胞菌。
【结论】1.成都地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率达到了45.16%。2.成都地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制主要有以下几个方面:①OprD<,2>孔道蛋白的缺失②主动外排的过渡表达③金属酶的产生。本结果与国内外的报道相符合。