不同猪群猪圆环病毒2型的检测及其全基因序列分析

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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)为无囊膜的单股负链DNA病毒,属圆环病毒科(Circoviridae)成员。PCV2与猪群中发生的多种传染性疾病密切相关,如仔猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)、猪皮炎与肾炎综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、猪呼吸道综合征(Porcine respiratory disease complex,PRDC)等。PMWS是一种以进行性消瘦和多系统病理损伤为主要特征的免疫抑制性疾病,主要发生在6-16周龄的断奶仔猪。该病在我国自2000年首次报道以来,已广泛流行于全国各省,威胁着我国的养猪业,并造成了巨大的经济损失。目前,对健康猪群中感染的PCV2病原学检测和基因遗传变异研究尚少有报道。本研究主要包括以下几方面内容: 1、PCV2套式PCR检测方法的建立:根据GenBank中已发表的PCV2全基因序列,设计两对PCV2特异性引物,建立用于PCV2检测的套式PCR检测方法。外侧引物p1/p2扩增的基因片段长度为647bp(92nt-738nt),内侧引物p3/p4扩增片段长219bp(319nt-537nt)。经优化PCR扩增条件后,第一轮PCR可扩增最低DNA模板浓度为10-5pg/mL;第二轮PCR可扩增最低DNA模板为10-8pg/mL,比第一轮扩增敏感性增加1000倍。通过与常规PCR对85份来自山东德州地区临床发病猪样品进行检测效率的比对试验,证明本方法的阳性检出率较高;同时也证明该地区发病猪群普遍存在PCV2感染。 2、患病猪群和健康猪群PCV2感染的检测:应用套式PCR方法,对我国10个省份826份临床发病猪肺脏、淋巴结样品和5个屠宰场146份健康猪淋巴结样品进行PCV2检测,结果为:患病猪群和健康猪群PCV2阳性样品分别为316份和64份,阳性率为38.3%和43.8%。表明我国发病猪群和健康猪群中普遍存在PCV2感染。 3、患病猪群PCV2检测阳性样品中其它病原体检测:对除甘肃省外的其它9个省份的283份PCV2阳性样品进行PRRSV、PPV和CSFV的PCR检测,结果为:CSFV、PRRSV和PPV阳性样品分别为74份、94份和46份,阳性率分别为26.1%、33.2%和16.3%。表明这些地区发病猪群中的双重感染情况普遍存在。 4、两类猪群感染的PCV2全基因序列分析:根据GenBank中已发表PCV2全基因序列,设计一对特异性引物,建立扩增全基因的PCR方法。用该方法从山东、河北、安徽、甘肃4个省份的4份患病猪群阳性病料和山东德州、南京、北京、甘肃泉州、白银7份健康猪群阳性样品中直接扩增出11个PCV2全基因片段。将扩增片段克隆
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