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[目的]研究 NCAPH 在头颈鳞状细胞癌(Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSC)与正常组织中的相对表达量及患者生存率,在此基础上,在细胞水平上研究了 NCAPH在鼻咽癌细胞及正常鼻咽上皮细胞中的相对表达差异;然后建立稳定的NCAPH低表达细胞系,研究NCAPH对鼻咽癌细胞增殖,迁移和细胞周期的影响;在动物水平建立鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤模型以研究NCAPH对裸鼠成瘤能力的影响,探讨NCAPH在鼻咽癌发生发展中的作用。[方法]1.首先利用生物信息学的方法来分析癌症和肿瘤基因图谱(Cancer Genome Atlas,TCGA)数据,选择44例正常样品和519例HNSC患者样品,研究NCAPH在HNSC与正常组织中的相对表达量和患者生存率关系。利用qRT-PCR、western blot的方法,在鼻咽癌细胞SUNE-]、CNE-2、5-8F和正常对照人永生化正常鼻咽上皮细胞NP69中直接检测NCAPH的mRNA和蛋白表达水平,比较分析鼻咽癌细胞中NCAPH基因表达水平是否异常,探讨其与生物信息学方法研究结果是否一致。2.构建两条NCAPH低表达载体和对照载体Scramble shRNA,HEK 293T细胞转染后,收集慢病毒感染野生型鼻咽癌细胞系SUNE-1、CNE-2、5-8F,建立NCAPH低表达细胞系,利用qRT-PCR、western blot的方法来鉴定敲低效率。使用NCAPH低表达的稳转细胞系,通过生长曲线、Brdu掺入实验、克隆形成实验、划痕实验、小室迁移实验等方法,观察NCAPH对细胞增殖、迁移等的影响。流式细胞术用于确定NCAPH对细胞周期的影响,并检测蛋白水平(例如:CDK1、CyclinB1等)的细胞周期相关标志物的表达水平的变化。3.用NCAPH稳定低表达和正常表达的对照鼻咽癌CNE-2、5-8F细胞,建立鼻咽癌裸鼠皮下异种移植瘤模型,观察肿瘤形成情况,包括肿瘤形成时间、瘤体重量和体积等。通过免疫组化的方法,研究鼻咽癌裸鼠移植瘤中NCAPH蛋白、增殖相关蛋白KI-67和凋亡相关蛋白Cleaved Caspase 3等的表达水平,在动物水平上研究NCAPH在动物体内的表达量及其影响鼻咽癌细胞成瘤能力的作用。[结果]1.通过生物信息学的分析方法,发现NCAPH在多种实体瘤中均显著的高表达,且在HNSC中差异明显;分析癌症和肿瘤基因图谱(Cancer Genome Atlas,TCGA)数据,发现NCAPH的蛋白表达差异显著(P<0.05),肿瘤样本明显高于正常样本;此外,分析HNSC患者NCAPH蛋白表达与总体生存率的关系,发现NCAPH低表达的患者比高表达的患者生存率更好。从永生化正常人鼻咽上皮细胞NP69、鼻咽癌细胞株SUNE-1、CNE-2、5-8F中提取mRNA和总蛋白,从mRNA水平和蛋白质水平进一步证实了 NCAPH在鼻咽癌细胞中呈高表达。2.通过构建NCAPH低表达质粒和对照质粒,建立NCAPH低表达细胞系,从相对mRNA、蛋白表达水平来检测鉴定敲低效率,敲低效率良好。使用已建立的NCAPH敲低细胞系,通过细胞生长曲线实验、Brdu掺入实验、克隆形成实验、细胞划痕实验和小室迁移实验,结果发现,敲低NCAPH后鼻咽癌细胞SUNE-1、CNE-2、5-8F的体外增殖、迁移均受到了抑制。通过流式细胞术检测细胞周期,发现敲低NCAPH后鼻咽癌细胞被阻滞在了 G2/M期,且G2/M期相关蛋白CDK1、CyclinB1的表达量发生了相应的改变。3.通过鼻咽癌裸鼠皮下异种移植瘤模型,发现敲低NCAPH后裸鼠移植瘤的重量、体积均减小。免疫组化结果发现敲低NCAPH后裸鼠移植瘤中NCAPH表达下调了,增殖相关蛋白KI-67表达量无明显差异,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase 3表达被上调。[结论]1.NCAPH在HNSC组织中显著高表达,且高表达的患者的生存率更差;NCAPH在鼻咽癌细胞系中高表达。2.敲低NCAPH后鼻咽癌细胞的增殖、迁移均受到抑制,且细胞周期阻滞在G2/M期,有效逆转了鼻咽癌细胞的恶性生物学特性。3.敲低NCAPH可以抑制裸鼠移植瘤的生长,并且肿瘤细胞中NCAPH蛋白的表达受到明显抑制、凋亡相关蛋白的表达增多。4.NCAPH是一个与鼻咽癌发生发展相关的致癌因子,有期望成为鼻咽癌诊断和治疗的新靶点。