【摘 要】
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目的:采用液相色谱质谱联用技术(LC-MS)对健康志愿者、早期胃癌患者及进展期胃癌患者的尿液样本进行检测,分析三组尿液中代谢产物的差异,进而寻找可以预测早期胃癌的潜在生物学标志物。方法:1、实验分组:根据术前检查及术后病理分为早期胃癌组、进展期胃癌组。另根据体检报告等选取健康志愿者为一组作为对照。2、样本处理:将存放于标本库中的尿液样本取出,于室温下融化,加入乙腈并高速离心(14000rpm,5m
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目的:采用液相色谱质谱联用技术(LC-MS)对健康志愿者、早期胃癌患者及进展期胃癌患者的尿液样本进行检测,分析三组尿液中代谢产物的差异,进而寻找可以预测早期胃癌的潜在生物学标志物。方法:1、实验分组:根据术前检查及术后病理分为早期胃癌组、进展期胃癌组。另根据体检报告等选取健康志愿者为一组作为对照。2、样本处理:将存放于标本库中的尿液样本取出,于室温下融化,加入乙腈并高速离心(14000rpm,5min),取尿液样本的上清液供液相色谱质谱联用仪检测分析。3、色谱分析与数据处理:通过液相色谱-质谱仪对三组尿液样本进行检测,得到早期胃癌组、进展期胃癌组及健康志愿者的代谢产物谱。进一步通过matlab软件对原始数据进行归一化等处理并做主成分分析,然后结合方差分析、偏最小二乘判别分析等统计学手段,找到早期胃癌患者、进展期胃癌患者及健康志愿者之间重要的差异代谢产物,将获得的数据导入人类代谢组数据库,对差异代谢物的结构进行鉴定,再利用ROC曲线及均值柱状图的绘制,筛选出区分能力强的差异代谢物作为潜在的生物标志物。结果:通过三组尿液样本的总离子流程图,可以直观地观察出三组尿液样本间的代谢产物存在差异差异。主成分分析图的结果显示三组尿液样本之间离散较好,可以很好地区分,进一步证实了三组尿液样本的代谢物存在差异,同组样本内部由于代谢物成分相似而聚集在一起。通过方差分析共筛选出P<0.05的差异性代谢产物324种;结合偏最小二乘判别分析筛选出权重(VIP)>1的11种重要差异的代谢产物,将数据导入人类代谢组数据库找到6种差异代谢物。最后,通过聚类分析及绘制ROC曲线,进一步筛选出4种区分能力强的差异代谢产物。结论:1.早期胃癌组与健康组尿液中的代谢物存在差异性,7-Methylguanine、Vinylacetylglycine、4-Vinylphenolsulfate可能是早期胃癌潜在的生物标志物;2.胃癌组与健康组尿液中的代谢物存在差异性,差异代谢物分别是Butyric acid、4-Vinylphenolsulfate、7-Methylguanine;3.7-Methylguanine在健康组、早期组及进展期胃癌组中呈逐渐升高趋势;Butyric acid在健康组及胃癌患者中呈下降趋势,而早期胃癌中尿液含量较进展期胃癌中的含量低。7-Methylguanine以及Butyric acid等在人体尿液中的含量可能与肿瘤的发生发展有关。
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