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目的1.耐药细胞株BGC823/5-Fu的耐药性鉴定2.观察健脾养胃方拆方对BGC823/5-Fu细胞的生长抑制作用3.观察健脾养胃方含药血清对BGC823/5-Fu细胞的生长抑制作用4.观察健脾养胃方及其拆方对BGC823/5-Fu细胞移植裸鼠的抑瘤率方法1.复苏前期小剂量冲击诱导建立的人胃癌耐药细胞BGC823/5-Fu,并用MTT法检测耐药系数RI,鉴定其耐药性。2.用MTT法检测不同浓度健脾养胃方拆方(砂仁-木香药对、陈皮-法半夏药对、三棱莪术-石见穿药对)分别作用于耐药细胞BGC823/5-Fu和普通细胞BGC823 48h后的生长抑制的情况,并通过绘制生长抑制曲线,计算各拆方的IC50,并与普通细胞BGC823的IC50进行比较。3.用Hoechst染色法观察健脾养胃方拆方对诱导耐药细胞BGC823/5-Fu凋亡的情况。每组分别予以砂仁-木香药对(2mg/ml、4mg/ml、6mg/ml)、陈皮-法半夏药对(5mg/ml、15mg/ml、25mg/ml)、三棱-莪术-石见穿药对(0.25mg/ml、0.5mg/ml、lmg/ml)、空白组(不加药),作用时间为48h。4.取雄性SD大鼠予以不同浓度健脾养胃方(2.4、1.2、0.6g/ml)连续灌胃14天,采用股动脉取血后制备含药血清。用MTT法检测不同浓度健脾养胃方含药血清对耐药细胞BGC823/5-Fu生长抑制的情况,并与普通BGC823细胞比较。5.采用皮下成瘤实验,将BALB/C裸鼠腋下接种BGC823/5-Fu细胞后,随机分为空白组(生理盐水)、5-Fu组(20mg/kg,腹腔注射)、健脾养胃方组(28g/kg)、砂仁-木香组(2.4g/kg)、健脾养胃方联合5-Fu组(健脾养胃方:28g/kg,5-Fu:20mg/kg)、砂仁-木香组联合5-Fu(砂仁-木香:2.4g/kg,5-Fu:20mg/kg)连续灌胃14天,观察健脾养胃方、砂仁-木香药对及与5-Fu联合使用对BGC823/5-Fu细胞移植裸鼠瘤体大小的抑制作用。结果1.重新复苏的耐药细胞BGC823/5-Fu,耐药系数为10.45。2.健脾养胃方拆方作用于耐药细胞BGC823/5-Fu和普通BGC823 48h后,对其生长具有抑制作用,陈皮-法半夏药对两株细胞的IC50分别为(22.18±0.94)mg/ml和(21.48±0.47)mg/ml,砂仁-木香药对对两株细胞的IC50分别为(6.69±0.12)mg/ml和(6.46±0.15)mg/ml,三棱-莪术-石见穿药对对两株细胞的IC50分别为(1.98±0.13)和(1.48±0.13)mg/ml,通过比较发现陈皮-法半夏与砂仁-木香药对对耐药细胞BGC823/5-Fu和普通BGC823的IC50无统计学差异(P>0.05),三棱-莪术-石见穿药对对BGC823/5-Fu细胞的IC50与对BGC823细胞的IC50相比,虽有统计学差异(P<0.05),但差异较小。3.Hoechst染色法实验显示,药物刺激耐药细胞BGC823/5-Fu 48h后,空白组见细胞核呈蓝色,砂仁-木香药对(2mg/ml、4mg/ml、6mg/ml)、陈皮-法半夏药对(5mg/ml、15mg/ml、25mg/ml)、三棱-莪术-石见穿药对(0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml)作用后的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。随着陈皮-法半夏与砂仁-木香药对浓度增高而BGC823/5-Fu细胞的细胞核呈致密浓染的数量越多,但三棱-莪术-石见穿药对虽可以使细胞核呈致密浓染,但并未随浓度的升高而使致密浓染的细胞核增多。4.健脾养胃方含药血清对耐药细胞BGC823/5-Fu和普通BGC823的生长均具有抑制作用,且抑制率随浓度增加而增高。健脾养胃方中浓度、高浓度含药血清对耐药细胞BGC823/5-Fu和普通细胞BGC823的抑制率无统计学差异(P>0.05)。5.动物结果:健脾养胃方与砂仁木香药对均可以抑制BGC823/5-Fu细胞移植裸鼠的瘤体生长,抑瘤率为36.3%和32.35%,抑制率高于单用5-Fu组(抑瘤率19.01%),中药与5-Fu联合使用后,可以提高抑瘤率(健脾养胃方+5-Fu组:55.19%;砂仁木香+5-Fu组:48.72%)。结论复苏前期诱导建立的胃癌耐药细胞系BGC823/5-Fu,再次检测其耐药系数为10.45,耐药细胞依旧具有耐药性。陈皮-法半夏药对、砂仁-木香药对可以引起BGC823/5-Fu细胞的凋亡,药物对细胞的抑制作用与其是否对5-Fu耐药无关。三棱-莪术-石见穿药对对BGC823/5-Fu细胞的抑制作用与其是否对5-Fu耐药无关,但药物并没有引起细胞凋亡。通过MTT法发现健脾养胃方含药血清对BGC823/5-Fu的抑制作用随浓度增高而增高,且与其是否对5-Fu耐药无关。健脾养胃方及砂仁-木香药对的体内实验表明,二者具有抑制瘤体生长的作用,且中药可以提高5-Fu的抑瘤效果,并且对小鼠体重影响较小。