猪脾脏转移因子壳聚糖—海藻酸钠微囊的制备及其生物活性研究

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转移因子(Transfer Factor,TF)是人或动物的白细胞中具有免疫活性的T淋巴细胞所释放的一类可透析的小分子多肽与核苷酸复合物。转移因子能将供体所具有的细胞免疫功能转移给受体,从而提高受体的免疫功能。然而,转移因子口服给药要经过一个复杂、漫长的体内转运过程、代谢过程,起效慢、生物利用度低。壳聚糖和海藻酸钠都是生物相容性良好、可降解的天然高分子材料,已广泛用于药物载体领域的研究,特别是作为微囊囊材用于提高蛋白质类药物的稳定性和缓释作用收到了较好的效果。为了减少胃酸和胃蛋白酶对转移因子结构与活性的影响,提高转移因子的稳定性,本实验以健康猪脾脏为原料,采用透析法提取转移因子;以壳聚糖和海藻酸钠为囊材,以乳化外部凝胶法制备出转移因子壳聚糖-海藻酸钠微囊,并对转移因子微囊相关性质及生物活性进行了考察。采用单因素实验设计和正交试验设计优化转移因子提取工艺,得到的最佳工艺为脾脏匀浆反复冻融9次、4℃透析24h、透析比例为1:2。所制备转移因子为淡黄色澄明液体,略带腥味,不含大分子蛋白质,A260/A280为2.82,最大吸收波长为251nm,无菌检查合格。以转移因子微囊形态和包封率为指标,通过单因素实验设计和正交试验设计优化转移因子壳聚糖-海藻酸钠微囊,所得最佳工艺为:海藻酸钠浓度为20g/L,植物油与海藻酸钠溶液体积比为4:1,Span-80浓度为70g/L,氯化钙浓度100g/L,成膜反应时间10min。所得微囊呈类球形,粒径均匀,平均包封率60.8%,载药量11.60mg/g。考察了转移因子微囊在不同介质中的溶胀能力和微囊在不同pH缓冲液中的释药性能,结果表明微囊具有良好的溶胀性能和释药性能。微囊在磷酸盐缓冲液(pH=7.4)中的释药方程为:ln(1-Q)=-0.0692t-0.6449(R2=0.9876),符合一级动力学方程。将转移因子壳聚糖-海藻酸钠微囊和转移因子分别给小白鼠灌胃,观察微囊和转移因子对小白鼠生长及其主要脏器指数的影响,并通过腹腔巨噬细胞吞噬实验和迟发型超敏反应实验比较微囊和转移因子的生物活性。结果表明,转移因子和转移因子微囊对小鼠无任何不良作用,对肝脏指数、脾脏指数无明显影响。转移因子和转移因子微囊都可以提高小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,提高小鼠迟发型超敏反应的能力,且转移因子微囊效果明显优于转移因子。本实验成功提取转移因子并将其制备成壳聚糖-海藻酸钠微囊,转移因子壳聚糖-海藻酸钠微囊的制备方法简单,产品质量可控。转移因子微囊质量评价、体外释放实验和生物活性实验表明,转移因子微囊相较于转移因子具有保存方便、稳定性增加、缓释长效、药效增加等特点,具有很好的应用前景。
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