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1背景"脾主统血"是脾脏重要生理功能之一,是指脾气具有统摄血液在脉道中正常循行,而不溢出脉外生理功能。明·薛己《薛氏医案》中明确提出"心主血、肝藏血、脾能统摄于血"。明·沈明宗《金匮要略编著》也提出:"五脏六腑之血,全赖脾气统摄"。与"脾主统血"相对应的病理状态称之为"脾不统血",临床除表现有脾气虚症状外,还伴随有慢性出血症状。从临床角度分析,免疫性血小板减少症慢性阶段是"脾不统血证"的代表性疾病,并具有从脾论治的适应症。临床实践也发现,免疫性血小板减少症患者经健脾益气摄血治疗后,患者临床症状能够得到明显改善,出血现象明显减轻,说明从脾论治免疫性血小板减少症具有明显的优势。出血与止血机制复杂,实际上是复杂的出凝血系统的动态平衡过程,而出凝血系统功能的恒定受血小板质量、凝血因子水平、血管活性物质等多种因素影响。过去一直认为,免疫性血小板减少症是免疫调节功能紊乱导致患者外周血小板数量减少伴骨髓巨核细胞发育成熟障碍,常见的广泛的皮肤、黏膜出血以及危险的内脏出血被认为是由于血小板数量与质量减少导致。但临床观察发现,部分免疫性血小板减少症患者经过健脾益气摄血治疗后,虽然患者外周血血小板数值并没有明显提升或上升幅度较少,而临床出血及气虚症状有了明显改善,这一结局不能完全用从脾论治改善患者外周血小板质量来解释,还可能存在着机制需要进行研究。因此,课题组在承担973项目过程中,提出了"脾主统血功能发挥不仅是在于脾,而是人体多器官功能的集合效应,是以线粒体功能与能量转换为核心,在脑-肠轴自稳状态下(脑神经与肠道功能调控),以血管分泌的活性物质控制血管功能状态为信息传递物质和效应靶点,以凝血因子与血小板数量、质量为物质基础,共同构成的生理调控网络体系"的理论假说,并期望通过以免疫性血小板减少症的小鼠模型为研究对象,围绕科学假说进行相应的基础与临床研究,探讨从脾论治免疫性血小板减少症效应靶点。2目的选择被动免疫造模法,通过豚鼠抗小鼠血小板血清法建立"脾不统血"的免疫性血小板减少症的病证结合模型,以健脾益气摄血方为干预药物,并设立不同对照组,观察药物干预后血管生长因子和血管活性物质的变化,探讨血管相关因子在从脾论治法则中发挥的实际作用及其价值。3方法用豚鼠抗小鼠血小板血清法建立免疫性血小板减少症病证结合小鼠模型,设置正常组、模型组、强的松组、健脾益气摄血组。分组后除正常组不予特殊处理外,其余各组均按100 μl/20g剂量向小鼠腹腔内注射1:4稀释的APS血清,每天一次重复注射至实验结束,造模第8天开始各组均按0.1ml/10g体积药物灌胃干预。第16天实验结束,ELISA法检测各组血管活性物质的表达量,HE染色并测量各组血管生长因子表达量,检测结果以(x ± s)表示,采用t检验进行统计分析,以p<0.05具有统计学意义。4结果各组主要相关指标检测结果如下:①内皮素-1(ET-1):模型组、强的松组和健脾益气摄血组腹主动脉内皮素-1含量均较正常对照组低(p<0.01);强的松治疗组内皮素-1含量较模型组降低(p<0.01);健脾益气摄血组内皮素-1含量较模型组比较,没有统计学意义(p>0.05),但是其内皮素含量降低的趋势与强的松治疗组相一致。②血管性血友病因子(vWF):模型组、强的松组、健脾益气摄血组小鼠肝组织内血管性血友病因子较正常对照组比较均明显降低(p<0.01);强的松组和健脾益气摄血组血管性血友病因子较模型组比较,无统计学意义(p>0.05)。③血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1):模型组、强的松组、健脾益气摄血组较正常组小鼠腹主动脉血管内皮细胞粘附分子浓度比较明显降低(p<0.01);强的松组内的血管内皮粘附分子浓度明显低于模型组,差异具有统计学意义(p<0.05)。③血栓调节蛋白(TM):与正常对照组比较,血栓调节蛋白各组明显降低(p<0.05);强的松组血栓调节蛋白浓度较模型组比较,无统计学意义(p>0.05),但是具有升高趋势;健脾益气摄血组与模型组比较,血栓调节蛋白明显降低,具有统计学意义(p<0.05)。④血清一氧化氮(NO):与正常组比较,血清一氧化氮浓度在各组均降低(p<0.05);强的松组和健脾益气摄血组中血清一氧化氮浓度较模型组比较无统计学意义(p>0.05)。⑤一氧化氮合酶3(NOS-3):与正常组比较,实验各组血清一氧化氮合酶3均有下降(p<0.05);与模型组比较,强的松组、健脾益气摄血组无统计学意义(p>0.05)。⑥血栓素A2(TXA2):模型组、正常组之间比较,无统计学意义(p>0.05);与正常组、模型组比较,强的松组、健脾益气摄血组明显升高(p<0.05)。⑦前列环素(PGI2):与正常组比较,实验各组检测值无统计学意义(p>0.05);与模型组比较,强的松组、健脾益气摄血组无统计学意义(p>0.05)。⑧血管内皮生长因子(VEGF):与正常组比较,模型组、强的松组明显降低(p<0.05);而健脾益气摄血组无统计学意义(p>0.05)。⑨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF):与正常组比较,模型组、强的松组、健脾益气摄血组中bFGF含量显著减少,差异具有统计学意义(p<0.05);与模型组比较,强的松组和健脾益气摄血组无统计学意义(p>0.05)。5 结论本项研究重要结论如下:①在使用豚鼠抗小鼠血小板血清法建立的免疫性血小板减少症的小鼠模型中,1:4的抗血小板血清浓度是最佳的造模浓度,并且建立的小鼠模型既符合免疫性血小板减少症,又符合脾不统血证的病证结合模型,并是目前研究本病的简单有效的病证结合模型。②血管活性物质ET-1、NO、NOS3、TM、vWF、VCAM-1和血管生长因子VEGF和bFGF共同参与了免疫性血小板减少症发生发展过程,从脾论治后的止血疗效是通过血管活性物质TM、TXA2以及血管内皮生长因子(VEGF)共同起作用的结果。表明TM、TXA2和VEGF既是"脾主统血"物质基础又是健脾益气摄血治则的重要位点。