适体-荧光传感器技术是一种灵敏、简便、低成本的新型检测方法。作用原理如下:①适体识别目标物并与之特异性结合,进而诱导自身发生构象转变。②适体的构象转变触发下游信号放大策略的发生以及荧光信号的产生。③荧光信号强度与目标物浓度正相关,并可根据荧光信号强度推算出相应目标物浓度。此类传感器可用于检测一系列目标物如离子、小分子、蛋白质、活细胞等。因此被广泛应用于疾病诊断、环境监测及生命科学分析。适体-荧光传感器是由适体、荧光物质以及一系列信号放大策略构成。其中适体有完整适体和分裂适体之分,完整适体对目标物结合力强,分裂适体内部二级结构较完整适体少,可避免因适体发生非特异性构象转变造成的背景信号升高。荧光信号根据产生模式分为标记型和免标记型。其中标记型可简化探针设计,而免标记型则可避免对探针标记造成的与目标物结合能力下降,此外其可以大大降低检测成本。信号扩增方式可分为酶促信号放大和无酶信号放大两种,其中酶促信号放大较无酶信号放大扩增能力强,且设计更为灵活。本论文针对酶辅助免标记信号放大策略进行研究。意图构建基于同种酶辅助的目标物循环及下游信号扩增的新型信号扩增策略。第一章为绪论部分,详细介绍了适体-荧光传感器的各个组成部分,同时总结了现有酶辅助信号放大策略存在的问题,并提出了对应的解决方法。第二章描述了现有用于腺苷检测的适体传感器所具备的问题,即忽视目标物循环以及适体-腺苷复合物尺寸过大阻碍后续探针与之结合,降低信号扩增效率。针对此问题我们构建了一种目标物和阻滞链双循环策略用于腺苷的检测。首先构建捕获链-阻滞链复合物,捕获链识别并结合腺苷使捕获链-阻滞链解离并导致阻滞链的游离,随后利用T7外切酶识别捕获链-腺苷复合物所包含双链中凹陷的5’末端部分并水解对应的单链序列,使捕获链与腺苷亲和力下降进而导致捕获链-腺苷复合物解离,以实现目标物的循环,同时利用阻滞链打开发夹H1,并给予同样原理实现阻滞链的循环,最终产生大量G四分体序列,NMM与这些G四分体序列结合后发出强烈的荧光信号,以实现对腺苷的灵敏检测。第三章,针对因分裂适体-目标物复合物不稳定造成信号扩增效率下降的问题,我们设计了新的目标物循环策略。以目标物诱导两单链相结合形成分裂适体-目标物复合物,该复合物继而在聚合酶和切刻酶作用下发生链取代扩增反应,链取代扩增产物进一步与分裂适体-目标物复合物结合,在聚合酶辅助下实现链延长,将不稳定的分裂适体-目标物复合物转化为稳定的DNA双链结构,并继续在聚合酶和切刻酶作用下发生链取代扩增以实现信号的放大。在此过程中原分裂适体-目标物复合物解离,并以此实现目标物的循环。我们利用此方法实现了凝血酶的灵敏检测。