论文部分内容阅读
研究背景及目的:胃癌是一种有着很高死亡率和发病率的癌症。寻找分子标志物对胃癌的诊断及预后有着非常重要的意义。OPCML(Opioid-binding protein/cell adhesion molecule-like),为鸦片受体类的细胞黏附因子,一种抑癌基因,主要定位于人类染色体11q25。目前,OPCML在胃癌中表达的研究较少,本研究旨在检测人胃癌组织中OPCML基因的表达及临床意义,并分析其过表达后对胃癌细胞株AGS增殖、克隆形成和迁移能力的影响,探讨OPCML基因在胃癌发生和发展过程中的可能作用机制。方法： (1)采用免疫组织化学技术检测OPCML蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其与胃癌临床病理学特征和预后的关系。(2)RT-PCR法检测OPCML在人胃癌细胞株(7901、AGS、BGC823、MKN28、N87、KATO、SNU1)及正常胃粘膜组织中基因的扩增情况。(3)构建表达载体pc DNA3.1-OPCML,以pc DNA3.1-Vector作为对照组,转染至胃癌细胞株AGS中,RT-PCR和Western分别检测转染后OPCML m RNA和蛋白的表达水平。(4)通过CCK8法、平板克隆形成实验、软琼脂实验和划痕实验,分析OPCML表达上调后,对胃癌细胞株AGS增殖、克隆形成和迁移能力等生物学作用的影响。结果： (1)OPCML在胃癌组织中呈现低表达,占68.6%(81/118);在118例胃癌组织中OPCML表达与胃癌浸润深度和分化程度有显著相关性(P<0.05);胃癌患者预后和OPCML的表达、胃癌浸润深度、淋巴结转移和远处转移密切相关(P<0.05)。(2)OPCML在胃癌细胞的m RNA表达水平显著低于正常胃粘膜组织。(3)RT-PCR、Western分别显示pc DNA3.1-OPCML转染后AGS细胞株中OPCML m RNA和蛋白表达水平明显升高。(4)CCK8实验结果显示AGS细胞转染OPCML基因后,增殖能力显著下降。(5)平板克隆形成实验显示OPCML过表达抑制AGS细胞克隆(数量、体积)的形成。转染组和对照组形成的克隆数分别为(8.33±5.29)和(29.87±10.82),平均克隆形成率相差72﹪。(6)软琼脂实验转染组和对照组形成克隆数分别为(23.33±6.66)和(69.67±10.50),相对克隆形成率差异为67﹪,两者具有统计学差异(P<0.05)。(7)划痕实验0 h、24 h、48 h结果显示,相比于对照组,转染组细胞迁移距离较小,划痕宽度明显较大结论： (1)OPCML在人胃癌组织及胃癌细胞株中低表达或者表达缺失;OPCML在胃癌中的表达与胃壁浸润深度和分化程度显著相关;OPCML表达与胃癌患者预后相关。(2)OPCML对胃癌细胞的增殖和迁移等生物学行为有显著抑制作用。