目的：　　 肺癌是我国高发肿瘤，且绝大多数肺癌可引起恶性胸水，目前临床上常用的胸腔积液查瘤细胞的方法敏感性甚低，文献报道为58％，部分胸腔内已有明显肿瘤转移或复发的患者，胸腔积液中细胞学检查仍可为阴性。　　 常规的细胞学检查主要是依靠癌细胞的形态特点进行诊断。由于癌细胞在积液中无组织及器官构架的束缚而自由漂浮和增生甚至经几代繁殖，失去了原来在组织中的形态特征，故单纯依靠形态学进行诊断敏感性较低，尤其是较早期异型性不太明显的癌细胞与反应性间皮细胞几乎无法区别，以至造成诊断结果中存在着相当数量的假阴性。建立一组科学、有效的诊断方法是提高肺癌诊断阳性率的有效途径，也是提高肺癌患者生存率与治愈率的关键。　　 本课题以目前国内外死亡率较高的肺癌为主攻对象，以肺癌患者的胸水为检测基础，采用RT-PCR方法检测癌细胞中VEGF和内皮抑素的转录水平；采用免疫细胞化学[2]检测VEGF在癌细胞中的定位表达。探讨诊断肺癌性胸水的新途径，评价这三种检测指标单-和联合应用对肺癌性胸水的临床应用价值。　　 方法：　　 收集中国医科大学附属第一医院2008年4月至2009年11月门诊及住院患者128例，其中：原发性肺癌92例，肺良性疾病患者36例。　　 1、免疫细胞化学染色　　 (1)收集胸水中细胞沉渣制作石蜡包埋块。　　 (2)切片，应用免疫细胞化学方法（streptavidin-peroxidase，S-P）染色。检测VEGF的表达情况。　　 2、逆转录多聚酶链式反应(Reverese transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)扩增及扩增产物的分析　　 (1)收集胸水中细胞沉渣提取总RNA。　　 (2)总RNA的反转录及VEGF和endostatin基因片段的扩增。　　 (3)银染色观察并分析结果。　　 结果：　　 1、免疫细胞化学检测VEGF，RT-PCR检测VEGF-mRNA和endostatin-mRNA在肺癌患者胸水中的阳性率均高于良性胸水中阳性表达率，差异非常显著(P＜0，05)。　　 2、用RT-PCR的方法联合检测VEGF-mRNA和endostatin-mRNA其敏感性和准确性分别是95.7％(88/92)，93.7％(120/128)，明显高于单项检测和常规细胞学检查。　　 3、检测VEGF、VEGF-mRNA及endostatin-mRNA在肺腺癌性胸腔积液与肺鳞癌性胸腔积液中比较，两者差异不显著(P＞0.05)。　　 4、肺癌患者胸腔积液中VEGF-mRNA的阳性表达率(82.6％)高于免疫细胞化学检测VEGF阳性表达率(71.7％)(P＜0.05)，检测VEGF-mRNA对肺癌胸膜微转移具有临床应用价值。　　 讨论　　 在胸腔积液产生的过程中，血管生成因子和抑制血管生成因子都起到重要的作用。VEGF和endostatin分别是目前研究发现的作用最强，特异性最高的血管生成促进因子和抑制因子。尤其是肺癌引起的胸腔积液中，VEGF被认为是最重要的血管生成因子之一，对胸腔积液的产生起到了重要的作用。以前的研究表明，VEGF能促进肿瘤血管生成，以提供肿瘤生长所需要的营养条件，并进一步为肿瘤的转移打下基础，同时可能通过多种途径刺激产生大量的endostatin，抑制原发和继发肿瘤血管的生成，与血管生成促进因子的作用对抗，达到一种平衡。　　 采用RT-PCR技术检测胸水内的微转移癌细胞，以达到早期诊断目的。该方法具有较高的敏感性，可在106～107个细胞中检测到1个目标细胞。此外，RNA在细胞外环境中非常不稳定，如在胸水内检测出VEGF-mRNA和endostatin-mRNA，则从理论上可以认为胸水中有癌细胞的存在。以前的研究表明，endostatin的产生能抑制VEGFmRNA的合成，且早期肺癌患者胸腔积液中内皮抑素的水平是增高的，本研究采用了endostatin-mRNA和VEGF-mRNA联合诊断的方法，能进一步提高诊断的敏感度和准确度。本课题中，有4位癌症患者的标本，细胞学检测是良性，但我们的结果显示endostatin-mRNA和VEGF-mRNA都为阳性，我们的实验比细胞学更早更准确的判断出了患者的病情。本研究结果提示在恶性胸腔积液的形成过程中内皮抑素和VEGF扮演了重要的角色，这与以前研究的结果是一致的。　　 本研究中，应用免疫细胞化学检测VEGF，RT-PCR方法检测VEGF-mRNA和endostatin-mRNA可有效的提高肺癌胸水诊断的敏感度，单独应用敏感度最高的为VEGF-mRNA达82.6％，三种检测指标两两联合应用时，两种检测方法单一及联合应用对肺癌性胸水诊断效能的比较，VEGF-mRNA和endostatin-mRNA联合应用有较高的敏感度和准确度分别是95.7％(88/92)，93.7％(120/128)对诊断癌性胸水有重要的临床价值，可作为研究早期癌细胞播散的一种重要方法，具有广泛的应用前景。　　 结论：　　 1、应用免疫细胞化学检测VEGF，RT-PCR检测VEGF，endostatin可有效的提高肺癌性胸水诊断的敏感度。　　 2、VEGF-mRNA和endostatin-mRNA联合应用有较高的敏感度和准确度，分别是95.7％(88/92)，93.7％(120/128)对肺癌性胸水的诊断有重要的临床应用价值。　　 3、检测肺癌胸腔积液中VEGF-mRNA的转录表达水平对诊断肺癌胸膜微转移具有重要的临床应用价值。