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目的:拟构建一种pH敏感的主动靶向的核壳型肽脂粒(LPNs)纳米传递系统(NDDS),包载抗癌药物阿霉素(DOX),修饰以iNGR多肽,使其兼具pH响应性和主动靶向性,用于乳腺癌的治疗,旨在提高抗癌疗效和降低全身毒性。内容:以聚组氨酸(PHIS)为内核,以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)和卵磷脂(EPC)为单层外壳制备得LPNs,包载抗肿瘤药物DOX,并用多肽iNGR(CRNGRGPDC)进行修饰。考察其粒径、电位、包封率(EE)、载药量(LE)、pH敏感性、稳定性等特性,并研究其在细胞水平和动物水平的抗肿瘤效应。方法:制剂的制备:利用缩合反应将iNGR偶联DSPE-PEG,制得DSPE-PEG-iNGR。采用一步沉淀法制备得到LPNs和iNGR-LPNs及其载药制剂LPNs/DOX、iNGR-LPNs/DOX。以薄膜分散法制备得到脂质体(Liposomes)作为对照。制剂的表征:采用动态光散射法在激光粒度仪测定其水力半径和电位,采用透射电镜(TEM)观测其形貌和粒径,通过高效液相色谱法测定其包封率和载药量,并从不同p H下粒径变化、电位变化和包载荧光探针芘的荧光变化等考察其pH敏感性,并对其在体外pH 7.4、6.5和5.5的释药行为和稳定性进行初步研究。制剂细胞水平的评价:细胞水平上采用流式细胞术定量检测4T1在pH 6.8和pH 7.4下LPNs/DOX、iNGR-LPNs/DOX、Lipo/DOX和游离DOX的摄取量。通过MTT法考察不同制剂对鼠源乳腺癌细胞4T1的生长抑制作用并求算其半数抑制浓度值(IC50)。制剂动物水平的评价:在高转移性鼠源乳腺癌4T1小鼠动物模型上进行活体成像实验来考察其肿瘤靶向作用;通过药效学实验评价了该纳米系统的治疗效果:从肿瘤体积大小变化、免疫组化CD 31染色和Ki 67染色三个方面来评价其抗癌疗效;实验通过小鼠体重变化和小鼠心脏H&E染色进行毒性评价。结果:所制得的LPNs粒径大小为109.70±7.60 nm,多分散系数(PDI)为0.13±0.01,Zeta电位为-4.57±1.24 mV,包封率为84.59±2.19%,载药量为9.08±0.33%,TEM可见其形貌均匀呈球形分布。随着pH降低,LPNs粒径逐渐增大,PDI增大,电位由负翻转为正,包载荧光探针芘的荧光强度降低,且在pH 6.5左右存在突变。药物释放实验表明LPNs/DOX在pH 5.5条件下24 h内累积释放量可达80%以上,pH 6.5时在50%左右,而pH 7.4时仅在20%左右,且iNGR的修饰对药物释放没有显著影响;LPNs/DOX在4℃存放条件下15天内粒径分布和电位没有明显变化。在体外摄取和抗肿瘤效应研究中,流式细胞摄取实验结果证明LPNs/DOX在pH 7.4时细胞摄取量为Lipo/DOX的4.90倍,在pH 6.8时为7.22倍;而在pH 6.8和7.4时,iNGR-LPNs/DOX与LPNs/DOX相比,细胞的DOX摄取量显著增加,分别是1.23倍和1.43倍。细胞抑制实验中,LPNs/DOX的半数抑制浓度IC50值为1.926μg/mL,明显低于Lipo/DOX(4.188μg/m L)。而iNGR-LPNs/DOX的IC50值(1.140μg/mL)低于LPNs/DOX的IC50值,接近游离DOX的IC50值(1.127μg/mL)。关于肿瘤靶向性研究的活体成像实验中,可见给药3 h后,LPNs/Di R和iNGR-LPNs/DiR均能较好靶向富集在肿瘤部位,且在不同时间点均可见iNGR-LPNs/Di R组荧光强于LPNs/Di R组,48 h后iNGR-LPNs/Di R组解剖得到的心、肝、脾、肺、肾等脏器和肿瘤的荧光强于LPNs/DiR组。小鼠体内药效学实验可见,肿瘤抑制能力:iNGR-LPNs/DOX>LPNs/DOX>Lipo/DOX>DOX>PBS。小鼠生存率:iNGR-LPNs/DOX组(49天)>LPNs/DOX组(45天)>DOX组(41天)>PBS组(39.5天)>Lipo/DOX组(35天)。免疫组化CD 31和Ki 67染色显示LPNs/DOX组和iNGR-LPNs/DOX组代表新生血管和增殖细胞的棕黄色明显少于PBS组、DOX组和Lipo/DOX组。制剂的初步毒性研究,可见Lipo/DOX组小鼠体重变化大,体重减少可达26%,而其他组小鼠体重变化不明显;小鼠心脏H&E染色可见Lipo/DOX组和DOX组呈现心肌细胞肿大,出现心肌细胞溶解的现象,且排列比较混乱,呈现一定的心脏毒性,而LPNs/DOX和iNGR-LPNs/DOX组和PBS组没有明显变化。结论:制备得到的iNGR-LPNs/DOX具有肿瘤特异的pH敏感性和主动靶向性,相比Lipo/DOX,在乳腺癌模型上呈现出更强的细胞抑制能力、细胞摄取能力、肿瘤抑制能力和更小的毒副作用。因此,iNGR-LPNs/DOX是一种治疗乳腺癌的有潜力的新型纳米载体。