蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。CK2是由两个催化亚基(α和α’)和两个调节亚基(β)组成的异四聚体(α2β2.ααβ2或α’2β2)。它参与广泛的细胞正常功能的调控，如基因表达，蛋白合成，细胞周期，细胞生长及分化，同时还参与如癌症发生，抗凋亡等病理过程。2003年已报道CK2有多达307种作用底物，其中243种得到体内实验确证，许多新的CK2底物还在不断地被发现。CK2在睾丸及脑组织中活性最高，睾丸组织中CK2α亚基水平是脑组织的两倍；CK2β亚基比脑组织高3～4倍，比其它组织高将近8～10倍。因此本研究拟从人睾丸cDNA文库中，利用酵母双杂交系统筛选与蛋白激酶CK2α亚基相互作用的蛋白。 方法：构建于pACT2质粒(酵母双杂交中的AD质粒)的人睾丸cDNA文库和本室已成功构建的BD质粒共转染感受态酵母菌AH109后得到的初筛候选阳性克隆，从这些候选克隆中，通过转化大肠杆菌JM109获得单一文库质粒，再进行自主激活报告基因检测和一对一回复性杂交实验，最后筛选出真阳性克隆(即与人蛋白激酶CK2α相互作用的蛋白)。经上述一对一回复确证为阳性相互作用的AD质粒。以pACT2质粒的通用引物为测序引物测定该质粒的插入片段cDNA序列。通过国际互联网络，以美国国立生物信息中心(NCBI)的BLAST作为主要的检索工具，检索主要程序采用BLAST，对相互作用蛋白的cDNA序列进行同源性分析，最终确定该相互作用蛋白的名称。通过原核表达获得阳性克隆蛋白，用以进一步证实CK2α与阳性克隆蛋白间的相互作用。 结果：(1)经过酵母双杂交实验，筛选出10种与蛋白激酶CK2α相互作用蛋白，核酸序列分析及同源性检索结果为：①人CK2β亚基；②人COP9组成性光形成性同源亚基5；③人基质蛋白3；④人核酸酶敏感元件结合蛋白1；⑤人核转换蛋白1；⑥人9KD1癌症/睾丸相关蛋白；⑦人线粒体细胞色素氧化酶Ⅲ；⑧人依莫帕米结合蛋白(异构酶)以及两个未知功能蛋白。(2)人9kD癌症/睾丸相关蛋白的原核表达及Westernblotting检测。 结论：用酵母双杂交系统从人睾丸cDNA文库中筛选出8种与人蛋白激酶CK2α相互作用的已知蛋白和2种未知功能蛋白。成功进行了人9Kd癌症/睾丸相关蛋白的原核表达及Westernblotting检测。