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活性氧物种(Reactive Oxygen Species,ROS)在多种生理、病理过程中扮演着重要角色。在生物体内,ROS可以传递细胞信息,清除外来异物、保护生物机体;但高浓度的ROS会破坏细胞内的抗氧化机制,造成细胞损伤,进而引发细胞凋亡。在多种ROS中,次氯酸(ClO-)因其强氧化、难追踪且常见于多种疾病引起了广泛关注。因而,人们致力于开发高灵敏度、高选择性的探针来探究生物体内的ClO-变化,并对相关的生理和病理过程进行精准分析,探究疾病的发生原理。然而,常见的次氯酸探针多为有机小分子,具有光漂白、发光量子效率低、易受背景荧光干扰等缺点,应用于细胞及活体成像时容易受到组织穿透深度和背景荧光的干扰。为了解决上述问题,在本文中,我们以长发光寿命的磷光铱(Ⅲ)配合物为分子骨架,设计、合成了两种次氯酸探针,即双发射磷光探针Ir NPs和近红外磷光探针Ir(btq)2(bmn),并分别通过比率发光成像、时间分辨光学成像和近红外成像技术实现了细胞内/外源性ClO-、甚至活体肿瘤模型中ClO-的高信噪比检测。主要内容如下:首先,我们将ClO-特征响应官能团通过共价键连接在N^N配体上,得到了铱(Ⅲ)配合物探针Ir1,并通过质谱、核磁等手段系统研究了其对ClO-的检测机理和响应性能。随后,我们通过纳米包覆法引入对ClO-不敏感的参比磷光铱(Ⅲ)配合物Ir2来构建双发射、长发光寿命的磷光探针Ir NPs。在进行ClO-检测时,双磷光发射的探针具有较高的发光量子效率和光稳定性,且具备自校准功能,其检测准确性高于单发射的发光探针;而时间分辨光学成像可以区分Ir NPs长发光寿命的磷光与短寿命的背景荧光,能够有效地收集Ir NPs的磷光信号而排除生物体自发荧光的干扰。我们利用Ir NPs,通过比率发光成像和时间分辨光学成像技术成功地实现了溶液、细胞内/外源性ClO-的特异性检测;进一步地,我们构建了活体肿瘤模型并首次验证了在伊利司莫(Elesclomol)刺激下的活体肿瘤中有大量ClO-产生。其次,通过提高C^N配体的共轭程度,降低其最高占据分子轨道和最低未占分子轨道之间的能隙,得到了近红外发光、长发光寿命的次氯酸磷光铱(Ⅲ)配合物探针Ir(btq)2(bmn)。通过实验,我们发现该探针具有近红外发光(650-800 nm)、特异性ClO-响应、较好的生物相容性(细胞渗透性好、生物毒性小)等优点。此外,在进行ClO-检测实验时,Ir(btq)2(bmn)表现出较好的光稳定性和较高的发光量子效率。重要的是,其长波长激发和近红外成像具有极大的优势,长波长激发具有更深的组织穿透深度和较小的光损伤,而近红外通道的生物体自发荧光信号较弱,对探针信号的干扰较小。因此,利用近红外光学成像和时间分辨光学成像技术,我们通过探针Ir(btq)2(bmn)实现了细胞内/外源性ClO-的特异性检测。