肝纤维化是由长期各种致病因子（如病毒、酒精等）导致的肝细胞坏死,肝脏出现损伤性修复、纤维瘢痕形成的病理生理过程。肝纤维化是肝硬化和大多数肝癌形成的必经环节,有效地控制肝纤维化是目前减少肝硬化和肝癌形成的重要预防手段。肝脏巨噬细胞在肝纤维化形成过程中扮演着重要的作用,研究发现,巨噬细胞既有抑制肝纤维形成的功能,又有促进肝纤维化的功能。例如M1型巨噬细胞可分泌促炎性因子（IL-6和IL-1 β等）加速肝纤维化胶原纤维的溶解;同时M2型巨噬细胞亦可分泌促纤维化因子（TGF-β）加速肝纤维化的形成。目前人们对巨噬细胞的研究重点也是着重于研究巨噬细胞在不同疾病模型下,不同类型的巨噬细胞的作用功能。而这往往与巨噬细胞膜表面受体的功能息息相关,当配体与对应的膜蛋白受体结合后,会激活细胞下游信号产生细胞的生物学效应,而不同类型的巨噬细胞其膜蛋白受体往往也会不同,因此所产生的功能作用也会不同。G蛋白偶联受体（GPCR）是细胞膜上最大的蛋白受体家族,目前已发现的高达800多种,P2Y6是G蛋白偶联受体嘌呤类受体家族的一员。本课题研究的重点也是基于巨噬细胞P2Y6受体对小鼠肝纤维化影响的研究。P2Y6受体全基因敲除小鼠由华东师范大学生命科学学院杜冰教授课题组构建,我们首先通过小鼠腹腔注射CCL4方式建立了小鼠肝纤维化模型,通过病理学（马松三色染色法,Masson）、血清学（丙氨酸转氨酶,ALT;天冬氨酸转氨酶,AST）、a-SMA 免疫荧光（Immunofluorescence Stainning,IF）和 mRNA 基因表达（RT-qPCR）等方法对C57BL/6（野生型,WT）和P2Y6-/-（敲除型,KO）小鼠肝纤维化模型进行了评估,结果显示:KO小鼠肝脏组织胶原纤维含量明显少于WT小鼠,且KO小鼠血清ALT、AST含量和a-SMA表达量均低于WT小鼠。以上结果表明P2Y6受体能促进肝纤维化的形成,全基因敲除后能显著缓解小鼠肝纤维化。为了揭示P2Y6受体在肝纤维疾病过程中是介导什么类型细胞发挥的功能,我们通过肝脏组织免疫荧光共定位技术发现P2Y6受体主要表达于巨噬细胞膜上,随后我们提取了小鼠骨髓细胞,体外进行巨噬细胞诱导后,经过RT-qPCR实验发现,P2Y6受体在M2型巨噬细胞呈现富集状态。随后我们进行了小鼠巨噬细胞体外实验,利用P2Y6配体UDP分别对WT和KO小鼠巨噬细胞进行了体外刺激,结果显示UDP能正向调控巨噬细胞TGF-β的分泌,并且呈现浓度依赖关系。与此同时,我们还通过流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测了 WT和KO小鼠肝脏巨噬细胞的比例,结果显示,KO小鼠巨噬细胞的比例与WT小鼠相比明显减少。表明P2Y6受体全基因敲除后,不仅抑制了 M2型巨噬细胞分泌TGF-β的功能,同时还减少了肝脏巨噬细胞的聚集,从而减轻了小鼠肝脏炎症反应,最终延缓了肝纤维化的形成。为了进一步证明P2Y6受体的功能作用,我们通过在WT小鼠肝纤维化诱导过程中,分别注射PBS、LPS和P2Y6受体抑制剂MRS2578,通过病理学Masson染色分析,结果显示,注射MRS2578组与注射PBS组相比小鼠肝纤维化明显缓解,注射LPS组与PBS组相比小鼠肝纤维化出现加重,而注射LPS+MRS2578组与LPS组小鼠相比小鼠肝纤维化又出现了缓解。表明抑制P2Y6受体能缓解小鼠肝纤维的形成,这与KO小鼠肝纤维化的表型功能一致。综上所述,我们揭示了 P2Y6受体通过调控肝脏中M2型巨噬细胞TGF-β的分泌促进了小鼠肝纤维化,而特异性抑制该受体可以有效缓解肝纤维化的形成。这为针对巨噬细胞开展肝纤维化的治疗药物研发提供了新的策略和理论依据。图[13]表[5]参[65]