【摘 要】
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目的采用不同浓度酒精作用于大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)，观察细胞自噬发生及其与P62变化的关系。方法用四甲偶氮唑盐比色法(MTT)观察酒精对PC12细胞生存率的影响；间接免疫荧
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目的采用不同浓度酒精作用于大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)，观察细胞自噬发生及其与P62变化的关系。方法用四甲偶氮唑盐比色法(MTT)观察酒精对PC12细胞生存率的影响；间接免疫荧光法检测细胞自噬标志性蛋白LC3和P62的变化；高内涵活细胞成像系统检测细胞LC3荧光强度；透射电镜检测细胞自噬的超微结构；Western blotting方法检测P62蛋白量的表达。结果100mmol/L、200mmol/L、400mmol/L和800mmol/L浓度酒精处理PC12细胞24h，与0mmol/L酒精组比较，PC12细胞生存率分别为91.97%(P＜0.05)、72.63%(P＜0.01)、58.23%(P＜0.01)、50.82%(P＜0.01)，酒精对PC12细胞的增殖有显著的抑制作用，呈浓度依赖性。间接免疫荧光检测到酒精致PC12细胞自噬标志性蛋白LC3在细胞核周围密度增高，并与P62形成点状聚集共定位；高内涵活细胞成像系统检测到酒精浓度为200mmol/L作用2h时，PC12细胞LC3自噬荧光强度最高；透射电镜也观察到酒精作用的PC12细胞质中自噬体和自噬溶酶体。Western blotting结果显示，不同浓度酒精处理PC12细胞2h，P62蛋白表达量显著增加(P＜0.01)；用200mmol/L浓度酒精处理PC12细胞，P62蛋白表达在2h达到最高值。结论酒精诱导PC12细胞的发生自噬现象，P62蛋白参与此自噬调控过程。
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