目的:(1)探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(human papillomavirus)DNA的有效手段;(2)分析宫颈癌组织HPV各高危型的检出率与临床的关系;(3)探讨宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA检测的临床意义;(4)探索广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E6及E7基因序列的多态性。 方法:(1)采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。(2)分析宫颈癌患者感染的高危HPV类型与患者临床分期、病理分型、分化程度、有无淋巴结转移等的关系。(3)采用HPV通用引物进行GP-PCR,扩增出宫颈癌患者盆腔淋巴结组织中HPVL1区基因序列,通过序列分析对盆腔淋巴结中的HPV进行型别鉴定,分析淋巴结中检出的各型HPV阳性率与淋巴转移组织病理学结果之间的关系。(4)采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,对含有HPV16型的标本采用自行设计的多重引物通过巢式PCR分别扩增出HPV16 E6及E7段基因序列,比较基因库中的HPV16(德国标准株)与检出的各临床病例的E6及E7段基因序列和蛋白序列,通过DNAsis分析临床病例分离株HPV16 E6及E7区的基因多态性和氨基酸变异。通过Antigenicity ValueX10方法进行抗原性分析。 结果:(1)50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16、18混合感染型最多见,检测出1例HPV58型,其L1区基因序列与德国标准株58型比对,未发现碱基变异。(2)50例宫颈癌组织中HPV16、18混合感染型最多见。宫颈鳞癌组织中HPV16、18混合感染型最多占48%。5