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目的:本课题探讨石斛夜光丸的光感受器细胞保护效应及视网膜重构相关机制,以期为石斛夜光丸在相关视网膜退行性疾病的临床应用提供部分实验和理论依据。方法:1.采用BALB/c小鼠(6周龄)随机分为正常对照组和光损伤模型组,进行光损伤造模,并通过光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)和视网膜电图(electroretinogram,ERG)对小鼠视网膜结构和功能进行分析,确定造模条件。2.6周龄光损伤BALB/c小鼠随机分为光损伤模型组和石斛夜光丸给药组,未经光损伤造模的同周龄BALB/c小鼠设为正常对照组。分别采用OCT,免疫组织化学和ERG对各组视网膜结构,光感受器细胞标记性蛋白与视功能进行分析。3.采用TUNEL对各组视网膜细胞凋亡进行原位分析。采用荧光实时定量PCR对各组视网膜细胞凋亡相关基因c-Fos,c-Jun和Bcl2的表达水平进行分析。4.采用免疫竞争荧光试剂盒对各组视网膜环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)含量进行分析。5.采用免疫组织化学对各组视网膜双极细胞、水平细胞、Müller细胞以及小胶质细胞进行标记。采用荧光实时定量PCR对各组视网膜胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)基因表达水平进行分析。结果:1.OCT和ERG评估结果提示,与正常对照组视网膜结构和视功能相比较,光损伤模型组视网膜结构紊乱,ERG振幅显著下降(P<0.05),提示光损伤造模成功。2.OCT,外核层(outer nuclear layer,ONL)厚度、光感受器细胞标记性蛋白和ERG分析结果表明,与正常对照组视网膜结构,光感受器细胞标记性蛋白表达分布及视功能相比较,光损伤模型组ONL结构严重破坏,ONL厚度显著降低(P<0.05),光感受器细胞标记性蛋白免疫阳性减弱甚至消失,ERG振幅显著下降(P<0.05),光敏感度下降;与光损伤模型组相比较,石斛夜光丸给药组ONL结构较完整,ONL厚度显著增加(P<0.05),光感受器细胞标记性蛋白免疫阳性增强,ERG振幅显著增大(P<0.05),光敏感度增强。3.TUNEL结果表明,正常对照组ONL未见TUNEL阳性染色;与正常对照组相比较,光损伤模型组ONL可见大量TUNEL阳性,而石斛夜光丸给药组ONL的TUNEL阳性减少。荧光实时定量PCR分析结果表明,与正常对照组相比较,光损伤模型组视网膜c-Fos,c-Jun表达显著上调(P<0.05),Bcl2表达显著降低(P<0.05);与光损伤模型组相比较,石斛夜光丸给药组视网膜c-Fos,c-Jun表达显著下调(P<0.05),而Bcl2表达水平显著升高(P<0.05)。4.c AMP含量分析结果表明,与正常对照组相比较,光损伤模型组视网膜c AMP含量显著增高(P<0.05);与光损伤模型组相比较,石斛夜光丸给药组视网膜c AMP含量显著降低(P<0.05)。5.免疫组织化学评估结果表明,与正常对照组双极细胞、水平细胞标志蛋白免疫染色阳性相比较,光损伤模型组视网膜上述神经元标志蛋白免疫阳性染色减弱或消失,与光损伤模型组相比较,石斛夜光丸给药组视网膜上述神经元标志蛋白免疫阳性增强;Müller细胞和小胶质细胞标志蛋白免疫组织化学分析结果表明,与正常对照组视网膜GFAP及Iba-1表达模式相比较,光损伤模型组胶质细胞标志蛋白免疫阳性模式异常,而石斛夜光丸给药组视网膜胶质细胞免疫阳性异常程度减轻;荧光实时定量PCR分析结果表明,光损伤模型组视网膜GFAP和TNF-α表达水平显著增高(P<0.05),而石斛夜光丸给药组视网膜GFAP和TNF-α表达水平显著降低(P<0.05)。结论:1.石斛夜光丸显著拮抗光损伤诱导的光感受器细胞结构与功能的退行性改变。2.石斛夜光丸光感受器细胞保护效应可能与以下机制相关:下调光损伤视网膜c-Fos和c-Jun的表达,上调Bcl2的表达,部分发挥拮抗光损伤诱导的光感受器细胞凋亡的作用;调控光感受器细胞退行性改变相关Gs和/或Gi偶联的G蛋白偶联受体(G protein coupled receptors,GPCR)通路异常,降低视网膜c AMP含量;促进光感受器细胞退行性病变进程中视网膜修复性重塑。