论文部分内容阅读
目的:雄黄为含砷矿物药,是我国常用的传统中药之一。长期、过量和不规范使用雄黄或其复方制剂会导致砷在体内的蓄积。中药配伍解毒增效理论是中成药解决有毒中药安全合理应用的重要方法。已有文献报道,牛黄解毒片中桔梗对雄黄诱导的肝肾毒性具有减毒作用,而具体的减毒机制还不明确。基于此,为探讨雄黄-桔梗配伍减毒增效机制,本研究:（1）采用原子荧光法（Atomic Fluorescence Spectrophotometry,AFS）测定不同雄黄-桔梗配伍比例对雄黄中可溶性砷含量的影响,筛选出雄黄-桔梗配伍的最佳减毒比例。（2）建立AFS探究雄黄-桔梗配伍对雄黄中砷体内过程的影响;（3）建立高效液相色谱-质谱联用法（High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,HPLC-MS）,研究雄黄-桔梗配伍对桔梗皂苷D体内过程的影响。为雄黄和桔梗的配伍减毒增效机制和临床应用研究提供实验基础和新的研究思路。研究方法:1、运用AFS分析方法测定经人工胃液处理不同配伍比例雄黄-桔梗中可溶性砷的含量,并考察了超声提取时间、人工胃液体积对雄黄中可溶性砷的影响。2、建立AFS分析方法测定血中砷的浓度,并用于雄黄组和雄黄-桔梗配伍组血中砷的药动学研究,绘制血砷浓度-时间曲线图,并比较药动学参数的差异。3、建立HPLC-MS分析方法检测血浆中桔梗皂苷D的浓度,并用于桔梗组和雄黄-桔梗组血的行浆差数中异据桔。处梗实理皂验,苷数采据用D以独的平立药均样动值本学t±研检标究验准,法差绘（表制o示n血e-（药sa浓m p度l e-）t时-t,e间st使曲）用线进S图行PS,组S并间19.比差0较异统药的计动显学学著软参性件数检进验,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果:1、当超声提取时间为1.5 h,加入人工胃液体积8 mL时,单味雄黄中可溶性砷溶出最多;不同配伍比例雄黄-桔梗组中可溶性砷含量随着桔梗比例的增加,提取液中可溶性砷含量减小,雄黄-桔梗比例1:6时,可溶性砷含量最少。2、建立的AFS分析方法可用于血液中砷的含量测定,符合生物样品分析要求。雄黄组和雄黄-桔梗组血砷的部分药代动力学参数存在显著性差异（P<0.05）。雄黄组和雄黄-桔梗组中血砷均出现双峰现象,且第一峰的Cmax值均大于第二峰的Cmax值。与雄黄组相比,雄黄-桔梗组第二个吸收峰的达峰时间显著减少,第二个吸收峰的达峰浓度Cmax由7.72±1.62μg/mL增大到11.3±3.74μg/mL（P<0.05）,提示雄黄-桔梗组中砷在大鼠体内的吸收加快;第一个吸收峰半衰期t1/2由59.6±14.9 h降低到18.1±6.46 h（P<0.05）,表明砷在体内代谢速率加快。3、桔梗中桔梗皂苷D（Platycodin D,PD）在2.00-160 ng/mL范围内线性关系良好（R2>0.999）,定量下限为2.00 ng/mL。建立的HPLC-MS分析方法的专属性、精密度、准确度、提取回收率、基质效应和稳定性均符合生物样品分析要求。将所建立的大鼠血浆中桔梗皂苷D的HPLC-MS分析方法,应用于桔梗组和雄黄-桔梗组在大鼠血浆中的药动学研究;并进一步比较了桔梗皂苷D的药动学行为差异。结果显示:与桔梗组相比,桔梗-雄黄组中的桔梗皂苷D的达峰浓度Cmax和药物-浓度时间曲线下面积AUC0-t显著减小（P<0.05）,达峰时间Tmax、平均驻留时间MRT和半衰期t1/2增大（P<0.05）,提示雄黄-桔梗组中桔梗皂苷D在体内呈现吸收、分布和消除变慢的过程。结论:1、建立的AFS分析方法简便、快速、灵敏度高、重现性好,可用于药材和血液中砷的含量测定。2、建立的HPLC-MS分析方法可用于血浆中桔梗皂苷D的含量测定,方法具有分离效果好,选择性好,灵敏度高,精确性高,重复性好等优点。3、桔梗可以显著减少雄黄中可溶性砷的溶出,加快大鼠体内雄黄中砷的吸收和代谢,从而减弱雄黄的毒性。桔梗皂苷D在体内的吸收和代谢速率较快,雄黄可以延长桔梗皂苷D在体内作用的时间。