论文部分内容阅读
目的：通过体外细胞模型、动物实验和初步临床观察,研究卡巴胆碱对严重创(烧)伤后肠I/R损伤和肠功能障碍的保护作用、有效剂量和可能机制,为卡巴胆碱用于防治创、烧伤休克复苏后肠I/R损伤和MODS的临床研究提供实验依据、技术方法和可行性分析。方法：第一部分、卡巴胆碱对氧化应激刺激后肠上皮细胞和肠巨噬细胞促炎基因和氧自由基产生的影响：采用H2O2损伤体外培养的IEC,建立IEC氧化应激损伤模型。实验随机分为①实验组：大鼠IEC-6+卡巴胆碱+H202,观察卡巴胆碱对经H202刺激后的肠上皮细胞和平滑肌巨噬细胞释放活性氧及表达细胞因子；②对照组Ⅰ：大鼠IEC-6+生理盐水,观察未经HzO2刺激时大鼠肠上皮细胞和平滑肌巨噬细胞释放活性氧及表达细胞因子的水平；③对照组Ⅱ：大鼠IEC-6+H202,观察经H2O2刺激后的大鼠肠上皮细胞和平滑肌巨噬细胞释放活性氧及表达细胞因子的水平；④对照组Ⅲ：大鼠IEC-6细胞+卡巴胆碱,观察未经H202刺激时卡巴胆碱对大鼠肠上皮细胞和平滑肌巨噬细胞释放活性氧及表达细胞因子的影响。测定各组IEC中TNF-a、IL-6、MDA和NO含量变化；RT-QPCR检测各组IEC中TNF-amRNA和IL-6mRNA表达变化。第二部分、卡巴胆碱对肠I／R损伤动物肠道功能、肠粘膜血流量、肠粘膜局部以及全身炎症的影响：采用Wister大鼠开腹制作做空肠袋,夹闭肠系膜上动脉(superior mesenteric artery, SMA)阻断血流45分钟后恢复血流,制成肠缺血再灌流模型。动物随机分为实验组1组：卡巴胆碱(肌注)+肠部分I/R损伤；实验组2组：卡巴胆碱(口服)+肠部分I/R损伤；实验组3组：卡巴胆碱(肠袋内注射)+肠部分I/R损伤；对照1组：卡巴胆碱(口服或肌注或肠袋)+假手术；对照2组：生理盐水(口服或肌注或肠袋)+肠部分I／R损伤。分别在不同时间点,检测肠粘膜组织中DAO活性、TNF-a和MDA含量、TNF-amRNA及IL-6mRNA表达变化；应用多普勒血流仪测定肠粘膜血流量变化；以及肠道的吸收和排空能力、肠粘膜的组织病理学检查。第三部分、卡巴胆碱治疗烧伤延迟复苏后肠I／R损伤和器官功能障碍的初步临床研究：选择大面积烧伤(TBSA≥30%)Ⅲ。面积>10%)患者100例。入选标准：伤后4小时内未采取液体复苏治疗或／和虽经液体复苏治疗,但尿量<40ml/h和／或pHi<7.1。征得患者家属后分为：①卡巴胆碱治疗组(50例)：延迟复苏后除烧伤延迟复苏常规治疗外立即给予卡巴胆碱1.Omg,1次／日,经胃管或胃粘膜pH管给药,连续5天；②常规治疗组(50例)：不使用卡巴胆碱,采用烧伤延迟复苏常规治疗方法(包括常规补液、给予多巴胺和氧自由基清除剂)。进入程序后4小时、12小时、1天、3天、5天分别测定炎症介质、肠道指标、脏器功能指标和外周血CD14+单核细胞HLA-DR表达率、外周血淋巴细胞凋亡率。结果：1、卡巴胆碱对氧化应激刺激后肠上皮细胞和肠巨噬细胞促炎基因和氧自由基产生的影响的研究显示：对照组ⅢTNF-a、IL-6、MDA和NO含量；以及TNF-amRNA和IL-6mRNA表达水平明显高于其他各组(P<0.01)；实验组与对照组Ⅲ相比TNF-a、IL-6、MDA和NO含量；以及TNF-amRNA和IL-6mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。2、卡巴胆碱对肠I/R损伤动物肠道功能、肠粘膜血流量、肠粘膜局部以及全身炎症的影响研究显示：对照2组炎症因子水平、通透性、脏器功能损害程度明显高于其他各组(P<0.01)；而粘膜血流量、吸收和排出功能明显低于其他各组(P<0.01)；3个实验组与对照2组相比较,各项指标明显好转(P<0.01)。此外,3个实验组间相比较,实验3组各项指标优于其他两组(P<0.05)。3、卡巴胆碱治疗烧伤延迟复苏后肠I/R损伤和器官功能障碍的初步临床研究显示：卡巴胆碱治疗组与常规治疗组比较,炎症因子水平明显降低(P<0.01)、肠道及脏器功能指标明显好转(P<0.01)、免疫指标亦明显改善(P<0.01)。结论：1、体外实验卡巴胆碱能减轻IEC氧化应激损伤；卡巴胆碱减轻IEC氧化应激损伤机制可能是：减少氧化应激时肠上皮细胞TNF-a、IL-6、MDA和NO产生。2、卡巴胆碱能减轻肠缺血再灌流损伤；卡巴胆碱减轻肠缺血再灌流损伤主要机制可能是：减少肠缺血再灌流时炎症因子的产生、增加肠缺血再灌流时肠粘膜血流量、增强肠粘膜吸收和排出能力。3、卡巴胆碱通过降低炎症反应、改善肠粘膜血流、提高免疫力从而减轻烧伤延迟复苏后病人肠I/R损伤,保护其脏器功能。