紫花苜蓿(Medicago sativa) MsYSL6、MsYSL7基因功能分析

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黄色条纹蛋白(Yellow stripe-like protein,YSL)功能重要且广泛。紫花苜蓿YSL蛋白研究报道较少,作用机制尚不明确。紫花苜蓿再生体系的建立也不够完善。本研究以转MsYSL6和MsYSL7烟草为材料,进行后代筛选、亚显微结构观察、光合参数测定实验;分析了转基因烟草对非生物胁迫,金属胁迫的响应;研究了2,4-D与6-BA对肇东苜蓿愈伤组织形成的影响,主要研究结果如下:1.转MsYSL6和MsYSL7烟草后代筛选及性状分析利用卡那培养基对转MsYSL6和MsYSL7烟草种子逐代筛选,得到了T2、T3代抗性苗;对抗性苗进行PCR鉴定,获到7个MsYSL6 T2株系和7个MsYSL7 T3株系。与WT相比,MsYSL6和MsYSL7基因的转入导致烟草叶绿体中类囊体数目增多、淀粉粒增多;叶绿体含量增加;光合参数增加。MsYSL6和Ms YSL7基因导入提高了转基因烟草的光合作用能力。2.转MsYSL6烟草对非生物胁迫的响应盐、碱胁迫下,转MsYSL6烟草叶片黄化程度低于WT;干旱胁迫下,转MsYSL6烟草的种子萌发率、幼苗根长低于WT。MsYSL6基因导入提高了烟草对盐、碱、干旱胁迫的耐受性。3.转MsYSL6和MsYSL7烟草对金属胁迫的响应铜、镉胁迫下,转MsYSL6和MsYSL7烟草叶片黄化程度低于WT;种子萌发率显著高于WT;幼苗的长势优于WT,根长、鲜重、叶绿素含量均显著高于WT;叶片氧化损伤程度小;MsYSL6和MsYSL7基因导入提高了烟草对铜、镉胁迫的耐受性。4.肇东苜蓿组织培养体系的建立利用生长激素2,4-D和细胞分裂素6-BA作为诱导激素,以肇东苜蓿子叶节、叶片和茎为外植体进行愈伤组织诱导。发现肇东苜蓿子叶节为最佳诱导外植体。MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA为最佳子叶节诱导培养基。愈伤组织在MS+0.5mg/L 6-BA+30 mg/L蔗糖培养基上分化,1/2MS+15 mg/L蔗糖为生根培养基培养,获得了完整的肇东苜蓿植株,建立了一个稳定、高效的肇东苜蓿再生体系。
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