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目的：应用基因工程的方法构建、表达和纯化肝癌相关抗原H2-calponin(CNN2)；分离纯化CNN2蛋白；利用CNN2作为抗原检测肝癌患者血清中抗CNN2抗体的表达情况。方法：PCR扩增CNN2cDNA序列,用基因工程技术将CNN2基因重组到表达质粒pColdⅢ中,分别转化E.coli BL21(DE3)pLysS宿主菌。优化表达条件(如,诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度等),大体积培养基因工程菌、菌体经超声破菌离心后,上Ni-NTA亲和柱纯化获得CNN2融合蛋白,WB检测表达出来的蛋白是否能与抗CNN2抗体结合;SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况；依次探索ELISA的最适实验条件,然后用己建立起来的间接ELISA方法检测175例肝癌病人血清的抗CNN2蛋白表达情况。结果：成功扩增出CNN2基因,将CNN2基因与pColdⅢ表达质粒进行双酶切,T4DNA连接酶连接CNN2基因与质粒,连接产物转化DH5α菌,菌液涂LB板培养后能在含有Amp的培养基上生长。菌液PCR能扩增出目的基因片段,从菌液中提质粒后用NdeⅠ和SalⅠ双酶切,出现1000bp左右的CNN2条带和较大的质粒条带,最后测序并与NCBⅠ上已有序列进行比对,结果完全吻合,相似度100%；为获取最大CNN2蛋白表达量,将基因工程菌进行表达条件优化,优化结果为：1∶100转菌液,37℃培养2.5h后加诱导剂,诱导剂IPTG的浓度为0.6mM,诱导温度和时间为25℃诱导7h以上。诱导表达的基因工程菌经超声波破菌后,取上清和沉淀分别进行SDS-PAGE电泳,发现上清和沉淀中均有目的蛋白的出现,说明CNN2蛋白有可溶性蛋白的表达,蛋白质电泳扫描图谱显示重组质粒所表达的CNN2蛋白表达量占总蛋白的30%以上；WB检测发现蛋白片段能与抗CNN2抗体结合；以CNN2为抗原,探索ELISA检测肝癌患者血清中抗CNN2抗体的最佳条件,显示当CNN2包被浓度是10μg/ml,用0.5%BSA封闭,血清用PBST稀释成1∶1024,生物素化抗体稀释成1∶2000,亲和素稀释成1∶9000。用基因工程表达的CNN2为抗原,ELISA检测175例肝癌病人血清中抗CNN2抗体阳性情况,结果发现175例肝癌中有23例阳性,阳性率为13.14%。结论：成功构建出能可溶性表达CNN2蛋白的重组质粒；基因工程菌表达优化条件是IPTG浓度0.6mM,诱导时间7h在25℃；ELISA检测肝癌血清抗CNN2抗体的最适条件是蛋白浓度10μg/ml,用0.5%BSA封闭,血清用PBST稀释成1∶1024,生物素化抗体稀释成1∶2000,亲和素稀释成1∶9000；175例肝癌病人血清CNN2抗体检出率为13.14%。