全球最新癌症统计报告显示,肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。2018年全球肺癌新发病例为182万,死亡病例159万。且每年发病率呈上升趋势。肺癌的病理类型主要包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌,非小细胞肺癌占肺癌总数的75%~80%,包括鳞状细胞癌,腺癌和大细胞未分化癌。由于其恶化进程快,放化疗敏感性差,以致预后极差。非小细胞肺癌的5年的生存率仅为15.9%。尽管近十年治疗的手段不断改进,其5年的生存率仍没有明显提高。因此,深入研究非小细胞肺癌的发病机制,寻找有意义的分子靶点,对于该疾病的诊治具有重要意义。去泛素化酶DUB3是去泛素酶家族的重要成员,能通过去泛素化作用稳定其底物。DUB3在炎症发生,细胞增殖,信号转导和DNA损伤修复等过程中起重要作用。研究表明DUB3蛋白在许多癌组织和细胞系中存在高表达,能通过调控细胞周期、细胞侵袭、迁移促进恶性表型。在非小细胞肺癌中,DUB3能够促进细胞G1-S期转化从而促进细胞增殖,但是其具体的分子机制至今仍不清楚。细胞周期蛋白家族成员cyclin A在细胞周期进程中起着至关重要的作用。一方面,cyclin A能通过与CDK2相互作用并激活CDK2促进细胞G1/S转换。此外,它还通过结合并激活CDK1参与G2/M转换。越来越多的证据表明cyclin A蛋白在基因转录和转录后水平受到严格调控,而在多种多肿瘤中存在过度表达,并且与细胞恶性增殖密切相关。为了进一步明确DUB3在非小细胞肺癌的功能作用,我们前期通过筛选一系列细胞周期相关蛋白,发现DUB3可能对cyclin A有调控作用。在NSCLC细胞中过表达DUB3蛋白能够上调cyclin A的水平,而敲低DUB3能够降低cyclin A水平。为了进一步阐明DUB3调控cyclin A的分子机制,我们通过免疫共沉淀实验发现DUB3和cyclin A存在相互作用。通过q-PCR,过表达点突变DUB3质粒,泛素化实验,半衰期实验等明确DUB3在非小细胞肺癌细胞内特异性去泛素化稳定cyclin A。通过细胞周期分析,我们发现敲低DUB3导致细胞周期阻滞在G0/G1期,而导入cyclin A表达则能逆转DUB3对细胞周期的影响,表明DUB3通过cyclin A调节细胞周期G1/S转换。在功能性研究中,我们发现DUB3通过稳定cyclin A介导NSCLC细胞增殖,并且在非小细胞肺癌组织中,我们发现DUB3蛋白与cyclin A蛋白表达之间存在显著相关性。本文通过上述研究,揭示了DUB3通过稳定cyclin A调控细胞周期进程,并促进非小细胞肺癌增殖的分子机制,为NSCLC的诊断和治疗提供了新的靶标和切入点,具有重要的科学意义和临床应用价值。