研究背景近年来,结直肠癌的发病率和死亡率呈明显上升趋势,全球结直肠癌每年发病新病例数约94万,每年近50万人死于结直肠癌。在我国,结直肠癌也是最常见的恶性肿瘤之一,因此寻求新的结直肠癌早期诊断和治疗的方法对于提高其手术切除率和生存率,改善生活质量具有重要的意义。随着肿瘤免疫学和分子生物学研究的进展,结直肠癌发生发展和转移的分子机制已经部份阐明,并为结直肠癌的基因治疗提供了理论基础;而结直肠癌的发生却是一个多基因参与、多阶段积累的复杂过程,在基因研究方面也取得重大进展,且学界上发现多种与结直肠癌发生、进展有关的基因。目前CCN2在结直肠癌形成机制中的作用国内外尚少见报道,且其在结直肠癌肿的作用机制尚不清楚。本研究为证实CCN2为一个癌基因提供参考;结直肠癌及直肠癌转移灶中CCN2的表达是一个较为常见的现象。CCN2导致结直肠癌的发生可能与Wnt/β-Catenin信号通路有关。目的研究CCN2在结直肠癌中表达及其与结直肠癌临床,病理指标的关系,判断CCN2是否可以作为诊断结直肠癌或判断结直肠癌预后的指标;并进一步研究其与Wnt/β-Catenin信号通路蛋白APC可能的关系,探讨CCN2在结直肠癌中的可能作用途径和机理;为下一步实验研究提供参考,为结直肠癌的防治和发现新的治疗靶点奠定一定的理论基础。方法1病例的选择和临床、病理资料的收集:收集正常结直肠粘膜组织(实验中选用痔疮术后痔上粘膜),结直肠腺瘤,局限性结直肠癌,转移性结直肠癌,癌旁组织及远处转移组织各30例。收集其临床资料,包括CEA指标、是否复发及复发时间、肿瘤分期、切除结直肠切缘是否残留有肿瘤、肿瘤APGBI及Cr-POSSUM评分系统评分、生存时间等等。2检测上述患者病理标本CCN2和Wnt/β-Catenin信号通路主要成员APC蛋白的表达强度:采用免疫组织化学链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶法(SP法)评价CCN2蛋白及APC蛋白的表达(Zymed公司免疫组化试剂盒)。参照Fromowitz评分标准得出阳性细胞百分率,再按多数阳性细胞呈现的染色强度予以记分,将上述两项得分相加。蛋白强度用阴性(1分)、弱阳性(2分)、中等阳性(3分)、和强阳性(4分)表示,标本一式四份,由两位病理医生双盲阅片,取均数。3应用spss16.0统计软件统计学分析:应用Kaplan-Meier生存分析和单变量Cox成比例危险因子模型(univariate cox proportional harzards model),评价结直肠癌复发危险性的个体变量。分析CCN2及APC蛋白与临床病理特征和预后状况之间的关系。除CCN2蛋白及APC蛋白表达量外,其他变量包括CEA水平、肿瘤最大直径、肿瘤分期和手术切缘情况。四格表资料用χ~2检验,若有格子理论频值小于5或总例数小于40,则用校正χ~2检验或Fisher确切概率法。结果免疫组织化学SP法:(1)本实验(表1及表3)显示:在局限性结直肠癌、转移性结直肠癌及远处转移组织中CCN2蛋白均表现为高表达(分别为76.67%、73.33%和70.00%);而在癌旁组织、结直肠腺瘤、正常结直肠粘膜组织表达低,分别为6.67%、23.33%、0.00%);χ~2=74.263,P=0.000,差异有统计学意义。(2)而APC蛋白在局限性结直肠癌、转移性结直肠癌及远处转移组织中CCN2蛋白均表现为低表达(分别为26.67%、23.33%和16.67%);在癌旁组织、结直肠腺瘤、正常结直肠粘膜组织表达高,分别为86.67%、76.67%、90.00%);χ~2=70.00,P=0.000,差异有统计学意义。(3)结直肠癌组织中CCN2表达与患者年龄、性别、肿瘤直径和肿瘤组织病理分型作比较时的P值均大于0.05,说明结直肠癌组织中CCN2的表达与患者年龄、性别及肿瘤组织病理分型无关;而与肿瘤的TNM分期及5年生存率、CEA水平作比较时,(分别为χ~2=4.689,P=0.03,χ~2=4.13,P=0.042),差异有统计学意义,说明结直肠癌组织中CCN2的表达与肿瘤的TNM分期及5年生存率密切相关。CCN2蛋白表达增强时,肿瘤分期越晚,预后也越差。结论1、CCN2基因可能是一种癌基因,CCN2在结直肠癌中表达与结直肠癌临床,病理指标有关系,CCN2可考虑作为诊断结直肠癌或判断结直肠癌预后的指标;2、CCN2在结直肠癌中的作用途径和机理可能与Wnt/β-Catenin信号通路蛋白APC有关;3、本研究为下一步细胞动物实验研究提供参考,为结直肠癌的防治和发现新的治疗靶点奠定一定的理论基础。