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最新研究表明,肿瘤组织中存在一小群具有干细胞特性的细胞,能通过不对称分裂保持细胞自我更新和多向分化潜能,从而导致肿瘤细胞不断增殖,促进了肿瘤异质性和多样性的产生,这部分细胞被称为肿瘤干细胞(Cancer StemCells,CSCs)。虽然这群细胞只占很少一部分,但是对于肿瘤的发展及预后起着关键作用。肿瘤干细胞由于其所处肿瘤微环境的调控、特异性表达许多ATP转运蛋白(ATP-binding Cassette Transporters,ABC)、以及DNA损伤修复功能导致肿瘤干细胞对各种化疗药物有很强的耐受性。 肿瘤的多药耐药(Multiple Drug Resistance,MDR)是导致化疗失败的重要原因,由于肿瘤干细胞对肿瘤的耐药及预后有很大影响,靶向肿瘤干细胞的肿瘤治疗新策略成为新型抗肿瘤治疗的关键。因此,如何特异性杀伤肿瘤干细胞,寻找靶向肿瘤干细胞的药物是本课题研究的主要目的。 基于肿瘤干细胞表达ABC转运子这一特性,我们利用Hoechst33342染色进行流式筛选出具有干细胞特征的侧群细胞(Side Population,SP),建立了一种通用、简便、与肿瘤干细胞耐药这个功能相关的高通量筛选靶向杀伤肿瘤干细胞药物的平台。我们利用流式高通量检测的方法,对FDA批准的小分子抑制剂库进行了初步筛选。随后,通过排查与肿瘤干细胞相关信号通路无关以及使用剂量不符的一些药物,最终得到30种小分子抑制剂。接着,我们验证了筛选出的小分子抑制剂对肿瘤干细胞功能以及干性相关转录因子表达水平的影响。我们将肿瘤细胞中的侧群细胞分选出来并进行了体外培养,依据干细胞生长分化及克隆形成的能力,选用其中一些小分子抑制剂分别处理并观察其对体外培养的侧群细胞生长和克隆形成的影响,发现有7种小分子抑制剂能明显抑制侧群细胞的增殖和成球,2种小分子抑制剂能促进侧群细胞的分化,1种小分子抑制剂会诱导侧群细胞凋亡。同时,我们发现用不同小分子抑制剂处理肿瘤细胞会不同程度地调节干性相关基因Oct4、Nanog、Klf4、Myc和Sox2的表达,表明这些小分子抑制剂发挥其作用的机制并不相同。此外,我们对一批依据肿瘤干细胞相关激酶所设计合成的小分子抑制剂库进行了高通量筛选,得到了11种对肿瘤干细胞有影响的小分子抑制剂,并检测了其IC50和EC50值,筛选出两种能够很好的靶向抑制肿瘤干细胞的药物,今后可继续研究这些药物所靶向调控的激酶,并深入探索其抗癌机制。 总之,我们建立了一种快速高效筛选靶向肿瘤干细胞药物的平台,并筛选出一些能够特异性杀伤肿瘤干细胞的药物,同时也为新型药物的研发检测及老药新用提供了一种新思路。