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依据传统中医药理论,桑黄(Phellinus linteus)性甘、平,昧辛,归肝、膀胱经。现代药理研究发现,桑黄具有抗肿瘤、增强人体免疫力、抗炎、抗氧化、保肝及防止肝纤维化等作用。术后进行化疗或放疗,并同时服用桑黄,可以减轻患者的诸如食欲降低、呕吐、高热、脱发等副作用,强化患者的免疫系统,抑制残留肿瘤细胞的转移,相应改善末期癌症患者的各种症状。目前野生桑黄资源匮乏,而市场对桑黄的需求驱动了桑黄人工栽培技术的进步。研究表明,人工培养桑黄的多种有效成分与野生桑黄无异。本课题以桑黄菌丝体发酵液提取物一桑黄发酵液总黄酮(Total flavonoids from Phellinus linteus, PLTF)为实验药物,研究其对人胃癌SGC7901/ADR细胞耐药性的逆转作用,并探讨其可能的逆转机制,为传统中药桑黄在临床肿瘤治疗上提供更全面的理论依据。本课题首次对桑黄总黄酮的耐药逆转及其机制进行了探讨。主要研究方法及结果如下：(1)采用MTT比色法检测人胃癌SGC7901/ADR细胞对阿霉素(Adriamycin, ADR)的耐药倍数,结果显示SGC7901/ADR细胞对ADR的耐药倍数为126.77倍。光学显微镜下观察胃癌细胞形态,SGC7901细胞近乎为圆形；SGC7901/ADR细胞近乎为长梭形,并且细胞间拔丝样结构增多,细胞间连接较敏感细胞多。(2)采用MTT比色法进行PLTF对SGC7901/ADR细胞的细胞毒性实验,结果显示PLTF的IC20、IC50值依次为86.46μg/mL、302.57μg/mL。本实验选择PLTF对SGC7901/ADR细胞增殖抑制率小于20%的药物浓度作为非细胞毒性浓度。选用PLTF的浓度梯度为20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL,进行后续实验。(3)采用MTT比色法检测非细胞毒性浓度的PLTF对SGC7901/ADR细胞耐药性的逆转作用。结果显示,用PLTF作用SGC7901/ADR细胞48h后与ADR联用,ADR的ICso值随着PLTF浓度(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)的增大而减小,逆转倍数依次为2.89、5.09、6.41,且呈浓度依赖性。(4)采用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测PLTF对SGC7901/ADR细胞P_糖蛋白功能或表达量的影响。结果显示,PLTF处理SGC7901/ADR细胞1h,细胞内Rh123荧光强度较正常对照组无显著性差异,表明PLTF对细胞P-糖蛋白的功能无影响：PLTF处理SGC7901/ADR细胞48h,细胞内Rh123荧光强度随着PLTF浓度(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)的增大而增强,蓄积倍数依次为8.19、9.44、11.03,推测PLTF可能抑制了P-糖蛋白表达。PLTF处理SGC701/ADR细胞36h后加入ADR (6μg/mL),结果显示随着PLTF浓度的增加,细胞内ADR荧光强度明显增加,即PLTF促进了细胞内ADR的蓄积。(5)采用半定量RT-PCR检测PLTF对SGC7901/ADR细胞MDR1基因转录水平的影响。结果显示,对照组细胞内MDR1灰度值/β-actin灰度值之比为1.35%,SGC7901/ADR细胞经PLTF (5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)处理后的灰度比值依次为1.68%、1.48%、1.12%、0.581%和0.37%。(6)采用FCM结合免疫荧光法(Fluorescence immunoassay, FIA)检测PLTF对P-糖蛋白表达量的影响。结果显示,PLTF (20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL)处理细胞后P-糖蛋白的荧光强度依次降低了39.51%、53.78%、60.77%,呈浓度依赖性。(7)采用Western blot法检测PLTF对SGC7901/ADR细胞NF-κB信号通路的影响。结果显示,随着PLTF浓度的增加,细胞浆蛋白p-IκBα的表达量逐渐降低,细胞浆蛋白IκBα的表达量逐渐升高,细胞核蛋白NF-κB p65的表达量逐渐降低。提示PLTF可以抑制NF-κB信号通路中IκBα被磷酸化为p-IκBα,导致NF-κB p65核转位的数量变少。结论：PLTF可以促进Rh123和ADR在细胞内的蓄积,有效逆转肿瘤MDR。PLTF可以有效抑制I-κB的磷酸化,从而抑制NF-κB p65进入到细胞核内,下调SGC7901/ADR细胞MDR1基因的转录水平,减少细胞膜P-糖蛋白的表达。提示PLTF可能为P-糖蛋白介导的肿瘤多药耐药的有效逆转剂。