超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)别名肝蛋白、奥谷蛋白,简称：SOD。超氧化物歧化酶主要类型有三种：Cu、Zn-SOD、Fe-SOD。Mn-SOD。广泛存在于动物、植物和微生物组织细胞中。SOD是一种源于生命体的活性物质,可清除生物体新陈代谢产生的超氧阴离子自由基,同时,也可作为超氧阴离子的底物诱导酶,保护机体细胞免受有氧代谢物的损害,构成了细胞抗氧化损伤的第1道防线。人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。因此,SOD在临床医学、食品及日化工业上被广泛运用。蛹虫草又名北冬虫夏草,具多种有效成分,如虫草多糖、虫草酸、虫草素、超氧化物歧化酶和微量元素等,有很好的保健、滋补与治疗作用。有报道表明,虫草的药理性质与其所含的超氧化物歧化酶活性有关。蛹虫草中所含的SOD主要分布于菌丝体中,在子实体被采收后,仍有大量的菌丝体残留于培养基残基中。本实验重点研究了从蛹虫草固体培养残基和蛹虫草子实体中提取、分离纯化超氧化物歧化酶的方法,并对提取出的超氧化物歧化酶进行了稳定性的研究。同时,也对固体培养基不同成分对SOD含量的影响,以及子实体和固体培养残基中的SOD的含量及酶活性进行了对比。本实验先对蛹虫草子实体和固体培养残基中的SOD进行了粗提取,再通过硫酸盐分级盐析、DEAE-32阴离子交换层析和CM-52阳离子交换层析对粗提液中的SOD进一步分离纯化。酶比活力分别从39.OU/mg和29.5U/mg提高到939.5U/mg和897.4U/mg。纯化后的SOD经聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳得到两条谱带,测得其亚基相对分子量为16.71KDa和15.97KDa。本实验所得的超氧化物歧化酶的热稳定性较好,40-60℃下保温120min酶活基本保持不变,90℃下保温20min仍有20%的酶活。用不同浓度的H2O2和氯仿-乙醇试剂进行处理发现,所得SOD对H2O2较敏感,而对氯仿-乙醇试剂不敏感。将所得SOD酶液在200-700nm下进行连续扫谱,在260nm处有最大吸收峰,在690nm处有特征吸收峰。实验证明,本实验所得的蛹虫草SOD为Cu。Zn-SOD。通过对比可知,在蛹虫草的固体培养中,添加蚕蛹粉的培养基比不添加蚕蛹粉的培养基得到的蛹虫草SOD的活性明显要高。而本实验得到的子实体中SOD的酶活力为固体培养残基中SOD的酶活力的2倍左右,但可以看出,蛹虫草的固体培养残基中依然含有较多的SOD,且活性较高,具有一定的开发价值,为蛹虫草固体培养残基的再利用提供了依据。