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目的：研究Rap1b基因在Tubegin野生型斑马鱼系和HoxB4转基因斑马鱼系胚胎早期的表达情况以及表达差异，了解在斑马鱼胚胎造血系统发育过程中过表达HoxB4基因对Rap1b基因可能产生的影响，进一步研究Rap1b与HoxB4基因在造血系统中可能的相互关系。从而为HoxB4基因引起造血干细胞(hematopoietic stem cell，HSC)自我更新能力增强的具体机制提供一定的理论依据。 方法：收集0.75hpf-120hpf多个时相的Tubegin野生型斑马鱼胚胎，用TRIZOL法提取斑马鱼胚胎总 RNA，采用 RT-PCR方法克隆斑马鱼Rap1b基因片段，将得到的Rap1b基因片段和pCS2+质粒经BamHI及EcoRI双酶切后进行体外连接重组，通过对重组质粒进行双酶切、菌落PCR以及测序鉴定正确后，经T3 RNA体外转录体系合成地高辛标记的Rap1b基因的反义mRNA探针；分别选取三组不同的0.75hpf-72hpf（hours post-fertilization）之间11个时相点的胚胎，即分别为空白对照组（Tubegin野生型斑马鱼），实验对照组（转基因斑马鱼系TG:zLmo2:LDL-EGFP;TG:zLmo2:Cre），实验组（过表达HoxB4的转基因斑马鱼系TG:zLmo2:LDL-HoxB4-EGFP;TG:zLmo2:Cre）；用Rap1b反义 mRNA探针进行全胚胎原位杂交，观察野生型斑马鱼胚胎早期发育过程中Rap1b基因的表达情况，以及在过表达HoxB4基因的情况下对Rap1b基因表达的影响；在体视镜下观察并记录结果。应用半定量反转录-聚合酶链反应检测Rap1b基因mRNA在实验对照组及实验组的表达水平。 结果：采用RT-PCR方法成功克隆出斑马鱼胚胎Rap1b基因片段；利用基因重组技术构建了pCS2+-Rap1b重组质粒，经酶切、菌落PCR以及测序鉴定证明pCS2+-Rap1b重组质粒构建正确；经T3 RNA体外转录体系合成地高辛标记的Rap1b基因的反义mRNA探针；通过全胚胎原位杂交结果显示：Rap1b基因在 Tubegin野生型斑马鱼胚胎的3.7hpf-72hpf均有表达，表达情况如下：在0.75hpf的细胞分裂连接处、3.7hpf-6hpf的动物极、9hpf的神经外侧板、18hpf-24hpf的中后脑边缘、脊索神经系统、ICM区及尾芽、30hpf-36hpf的中后脑边缘、PBI区、脊索神经系统可见阳性杂交信号、48hpf-72hpf的耳蜗、脊索神经系统可见阳性杂交信号；在造血系统，从36hpf开始表达信号逐渐减弱，直至48hpf消失。Tubingen野生型空白对照组18hpf、24hpf、30hpf、48hpf、72hpf与实验对照组转基因系（TG:zLmo2:LDL-EGFP;TG:zLmo2:Cre）18hpf-72hpf之间未见明显差异；实验组（TG:zLmo2:LDL-HoxB4-EGFP;TG:zLmo2:Cre）36hpf与空白对照组及实验对照组比较，在造血系统的PBI区，实验组比其他两组表达增加。半定量反转录-聚合酶链反应实验显示：在36hpf斑马鱼胚胎，实验组Rap1b基因mRNA的表达水平较实验对照组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论：完成了pCS2+-Rap1b重组质粒的构建；制备了Rap1b基因的反义mRNA探针。通过对野生型斑马鱼胚胎全时相原位杂交，初步了解了Rap1b基因在Tubingen野生型斑马鱼胚胎早期的时空表达情况，发现过表达HoxB4基因的斑马鱼36hpf胚胎期造血区域Rap1b基因表达明显增强，结合半定量反转录-聚合酶链反应实验结果，推测在斑马鱼胚胎早期造血发育过程中Rap1b基因可能作为HoxB4的下游靶基因共同参与调节造血干细胞的增殖发育。