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本研究以菊花(Dendranthema morifolium(Ramaf.)Tzvel.)品种“日本黄”、为试验材料,获得了菊花叶片为外植体的高效再生体系。试验结果表明:菊花叶片小块接种在MS+6BA1.0mg/L(单位下同)+NAA0.5(单位下同)+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5g/L的培养基上,经过14d左右开始出现淡绿色愈伤组织,并且愈伤组织的诱导率高达97.5%;把愈伤组织接种到MS+6BA3.0 mg/L+NAA1.0+蔗糖3%+琼脂粉5.5g/L的培养基上诱导不定芽再生,40d左右可看到不定芽的长出,诱导率达100%。带丛芽的组织块接种在MS+6BA4.0+NAA0.01蔗糖3%+琼脂粉5.5g/L培养基上,经过一段时间的培养,可达到芽的增殖,再生芽在1/2MS+IBA0.5mg/L蔗糖3%+琼脂粉5.5g/L培养基上经过15d左右可诱导出根,生根率可达100%。 测定了叶片小块对Kan的抗性。以控制植物茎伸长的GAI为目的基因,利用农杆菌介导遗传转化法进行遗传转化的研究,同时研究了预培养时间、侵染时间、共培养时间、添加乙酰丁香酮对遗传转化率的影响。试验结果表明:菊花叶片组织对Kan的敏感浓度为20mg/L,不需要预培养、侵染时间为20mim、共培养时间为2d、加入乙酰丁香酮100 mg/LAS可提高转化率。受体材料在无选择压力的培养基培养3d,再转接有选择压力的筛选培养基中培养,可使转化率明显提高.受体材料接种到培养基(MS+6BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+2,4-D0.0mg/L+Cef100mg/L+Km20mg/L),20d左右形成愈伤组织,把愈伤组织接种到培养基(MS+6-BA3.0mg/L+NAA1.0mg/L+Km20mg/L)上进行抗性芽的筛选,当芽长到1~2cm时转到1/2MS+IBA(0.5mg/L)+Km(5mg/L)培养基上进行生根筛选。 对所获得的转化植株进行了PCR检测及Southern Blot鉴定。在7株经抗性筛选获得的植株中有5株PCR检测呈阳性,其中有3株总DNA Southern杂交后有明显的杂交信号,而非转化的再生植株则PCR呈阴性,无Southern杂交信号。说明目的基因6AI已成功整合到到菊花的基因组中。