【摘 要】
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该工作以大肠杆菌质粒pET-32b和乳酸菌质粒pTPKL为基础构建了大肠杆菌-双歧杆菌的穿梭质粒pHJ.以PCR方法从乳酸乳球菌（Lactococcus lactis)总报告基因插入pHJ中构建了双歧杆菌
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该工作以大肠杆菌质粒pET-32b和乳酸菌质粒pTPKL<,2>为基础构建了大肠杆菌-双歧杆菌的穿梭质粒pHJ.以PCR方法从乳酸乳球菌（Lactococcus lactis)总报告基因插入pHJ中构建了双歧杆菌的表达质粒pHJ-LDH,并采用电转化法将该质粒导入双叉双歧杆菌进行了表达研究.SDS-PAGE图谱中呈现和目的蛋白分子量大小相同的条带.Western blot结果确认了该条带为ldh基因的产物,每升菌中LDH的表达量约为2mg.LDH的酶活性测定结果表明,重组双叉杆歧杆菌的蛋白粗抽提液中LDH的比活性为5.5U/mg,在报造基因成功表达的基础上,我们以RT-PCR的方法从人的mRNA上扩增得到了肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因.并将该基因克隆到pHJ上,电转化入双叉双歧杆菌菌株,得到含重组人TNF-α的双叉双歧杆菌菌株,ELISA检测结果表明TNF-α在双歧杆菌中有表达.并通过口饲小鼠检验了含重组人TNF-α的双叉双歧杆菌对小鼠肝癌HAC实体瘤模型的抗肿瘤效果.
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