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研究背景:中药地黄为玄参科植物地黄的块根,著名的四大怀药之一,为常用滋补类中药。其主要有效成分有多糖类、苷类、氨基酸及少量的β-谷甾醇等。苷类为其主要成分,在苷类中又以环烯醚萜苷为主。梓醇(catalpol),又称脱对羟基苯甲酸梓苷,是一种环烯醚萜葡萄糖苷类化合物,在药典中被列为地黄药材鉴定的对照品。其具有止血、脑保护、肾脏保护、抗银屑病、解痉、抗炎、改善机体免疫力、抗骨质疏松、降血糖、利尿、缓泻、保肝及抗衰老等多种药理活性。对梓醇的药理研究,主要集中在脑保护、抗衰老、降血糖、保肝等方面,而对心肌保护方面的石开究甚少。目前,关于梓醇对心肌保护作用的体外实验研究尚未见报道,且尚缺乏相关的机制研究。 研究目的:本课题旨在从细胞学水平研究梓醇对缺糖损伤H9c2心肌细胞的保护作用,初步探讨梓醇对心肌损伤的保护作用及其可能的作用机制。 研究方法:选用大鼠H9c2心肌细胞进行培养,对H9c2心肌细胞给予梓醇预处理24h,然后给予缺糖6h处理建立缺糖损伤模型以模拟缺血模型,以果糖二磷酸钠(FDP)药物处理组作为阳性对照。于倒置显微镜下观察细胞形态,采用cck-8试剂盒检测细胞存活率,采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡、Hoechst33258染色法检测细胞核损伤,分别采用相应试剂盒测定谷草转氨酶(AST),活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力、还原性谷胱甘肽(GSH)浓度、一氧化氮(NO)含量,JC-1染色法检测线粒体膜电位(△ψm)变化,Western blotting法检测NF-κB、Bax蛋白变化。此外,还进行了一部分药物即时保护实验,即对H9c2心肌细胞缺糖处理的同时给予药物处理12h,然后采用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡、Hoechst33258染色法检测细胞核损伤情况,JC-1染色法检测线粒体膜电位(△ψm)变化,Western blotting法检测NF-κB蛋白表达变化。 研究结果:缺糖处理6h可造成H9c2心肌细胞存活率显著下降(P<0.001)、细胞凋亡率增加,AST活力明显升高(P<0.01)、SOD活力显著降低(P<0.001)、GSH浓度明显降低(P<0.05)及NO含量显著降低(P<0.001);同时造成线粒体膜电位破坏、Bax蛋白表达增加及NF-κB蛋白表达下降。梓醇和果糖二磷酸钠(FDP)预处理组与缺糖损伤组相比,细胞存活率明显增加(P<0.001),AST活力显著降低(P<0.01),SOD活力、GSH浓度及NO含量显著升高(P<0.001,P<0.01或P<0.05);此外,梓醇和FDP可减少线粒体膜电位的破坏,减少细胞凋亡,增强NF-κB蛋白表达,减少Bax蛋白表达。 研究结论:梓醇预保护可拮抗缺糖损伤引起的H9c2心肌细胞内AST活力升高,通过增强其SOD活力、增加NO含量、升高GSH浓度减少H9c2心肌细胞损伤,并通过抑制线粒体膜电位破坏、下调促凋亡因子Bax蛋白表达及上调NF-κB蛋白表达拮抗缺糖引起的心肌细胞凋亡。结果表明:梓醇可通过抗氧化作用及线粒体抗凋亡途径两个方面拮抗细胞凋亡保护心肌细胞。