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目前广泛使用的丝裂霉素C(MMC)法制备饲养层(Feeder)细胞(简称“传统方法”)有诸多问题有待优化:(1)产量低,成本高,消耗大量的人力物力;(2)易出现细胞增殖抑制不充分;(3)小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)的生物学行为易受影响,得到的Feeder细胞质量不高;(4)操作不灵活,易错过最佳处理时机等。因此,有必要开发新的方法,既能单批获得大量高质量的Feeder细胞,又能保证细胞增殖被充分抑制。首先,本研究在传统方法基础上进行改进优化,建立了悬浮-贴壁法,它能提高抑制细胞有丝分裂的效率,同时,还能筛选出状态良好的细胞作为Feeder,提高所得Feeder的质量。而且,我们无需密切观察MEFs的生长密度,不用担心错过最佳处理时间,操作更为灵活方便。其次,本研究对悬浮-贴壁法进一步优化,建立了利用细胞培养转瓶机CELLSPINSystem快速制备Feeder细胞的方法。CELLSPIN System的搅拌锤可在电磁场作用下不断旋转,能使细胞在悬浮状态下与培养基中的MMC充分接触,可明显提高MMC抑制细胞增殖的效率,缩短处理时间;悬浮状态下处理细胞,回收时无需消化液消化,可减少酶消化带来的细胞损伤,最大限度地保持细胞的良好状态;旋转瓶的容积是普通培养瓶/皿的数倍甚至上百倍,短时间内可处理大量细胞,在提高Feeder制备效率的同时,又能明显降低Feeder细胞的制备成本。所以,细胞培养转瓶机法便于人胚胎干细胞(hESCs)和人诱导型多潜能干细胞(hiPSCS)的大规模生产。