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背景现有治疗性HPV疫苗在宫颈癌人类临床试验中缺乏显著疗效。增强肿瘤抗原特异的杀伤效应细胞免疫应答是提升疫苗效果的重要策略。病毒样颗粒(VLPs)在激发体液免疫中已证明具有高度免疫原性,是理想的疫苗载体。目的本研究拟探讨以VLPs形式呈递HPV CTLs抗原肽,考察激发的特异细胞免疫应答以及对肿瘤生长的干预,以揭示VLPs作为治疗型疫苗载体的应用潜能,并提供候选治疗性HPV疫苗。方法根据文献报道选择小鼠中证明有效的4个HPV16E6、E7 CTLs表位,经基因重组将其DNA片段克隆于乙肝核心抗原(HBcAg)优势抗原表位。重组蛋白在大肠杆菌中经诱导表达,以硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜进行分析鉴定。制备的VLPs以预防性和治疗性策略分别对小鼠TC-1细胞移植肿瘤进行免疫干预。研究检测了小鼠肿瘤大小变化；脾细胞分离后经特异抗原肽刺激,以ELISA检测IFN-γ表达,以ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞,并以流式细胞分析仪检测CD8+IFN-γ+细胞；此外,本研究还评价了VLPs疫苗刺激机体产生的免疫记忆,探讨了体内预存的抗载体抗体、VLPs结构、免疫途径等因素对抗原特异治疗性VLPs疫苗免疫的影响。结果重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,纯化的蛋白主要以VLPs形式存在；基于E7(49-57)表位的VLPs以预防性策略免疫小鼠后,完全抑制了移植肿瘤的生长；在治疗性策略中,VLPs显著抑制了2-3mm肿瘤的增长,对于5-6mm甚至更大的肿瘤(8-9mm),VLPs疫苗免疫同样显示了明显的肿瘤生长抑制作用；此外,VLPs疫苗刺激机体产生了有效的免疫记忆应答,最少可持续15周；机体预存的抗载体抗体对VLPs疫苗发挥作用无显著影响；抗原肽体外刺激脾细胞,结果显示疫苗免疫小鼠脾细胞具有增强的IFN-γ表达,提高的分泌IFN-γ的淋巴细胞水平,以及增加的小鼠体内CD8+IFN-γ+细胞数目。结论呈递HPV E7 CTLs表位的VLPs疫苗能够激发持续有效的E7特异细胞免疫应答,显著抑制肿瘤生长,有希望作为候选治疗性HPV疫苗,同时,HBcAg VLPs是有应用潜能的治疗性疫苗载体。